La proteine disulfure isomerase : - nouveaux procedes d'utilisation in vitro - etude de ses interactions avec l'atp, les hormones et les peptides

par REGINE GUTHAPFEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de E. QUEMENEUR.

Soutenue en 1996

à Paris 11 .


  • Résumé

    Le repliement des proteines assiste par les proteines chaperon et certains catalyseurs constitue une aide precieuse pour produire des proteines biologiquement actives a partir de proteines recombinantes agregees ou de proteines synthetiques non repliees. La proteine disulfure isomerase (pdi) est une enzyme multifonctionnelle du reticulum endoplasmique (re), responsable en particulier de la formation et du remaniement des ponts disulfure chez les eucaryotes. L'objectif de ce travail consiste en la mise au point d'un outil efficace et pratique qui aide au repliement de proteines recombinantes ou de synthese. A cet effet, nous avons, dans un premier temps, elabore deux nouvelles strategies d'utilisation de pdi qui permettent de resoudre les problemes engendres par le fonctionnement de l'enzyme en quantite quasi-stoechiometrique par rapport a son substrat: l'immobilisation de pdi sur support solide polysaccharidique (conservation de 50% de l'activite) ou sa biotinylation (conservation totale de l'activite) suivie d'une capture par la streptavidine prealablement adsorbee sur des billes d'acrylamide. Ces deux methodes autorisent la renaturation d'une proteine par le catalyseur sans l'etape de purification post-renaturation qui etait incontournable jusqu'ici. La seconde partie de ce travail consiste en l'approfondissement des connaissances sur les interactions de pdi avec differents ligands afin de determiner leurs inter-relations et de mettre en evidence les effecteurs susceptibles d'ameliorer les proprietes catalytiques de l'enzyme. A ce titre, les interactions de pdi avec l'atp, la 3,5,3'-triiodo-l-thyronine et les peptides n-glycosylables ont ete etudiees. Aucun de ces trois types de ligands ne s'est revele etre un effecteur positif de l'activite de formation et d'isomerisation des ponts disulfure de pdi. La liaison des peptides sur pdi et l'activite atpasique de l'enzyme semblent lies a son activite chaperon


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Informations

  • Détails : 161 P.
  • Annexes : 212 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-013093
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