Recherche de genes impliques dans le developpement de la souris par piegeage dans les cellules souches embryonnaires

par Anne Camus

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de J. BARRA.

Soutenue en 1996

à Paris 11 .


  • Résumé

    Nous nous proposions de cloner et de caracteriser des genes nouveaux dont l'activite est requise pour le developpement normal de l'embryon de souris. Nous avons choisi une approche de piegeage de genes (gene-trap) qui consiste en une strategie de mutagenese aleatoire par insertion dans le genome des cellules souches embryonnaires (es) d'un gene rapporteur depourvu de promoteur mais comprenant a l'extremite 5'ter un site accepteur d'epissage. L'activite de ce gene rapporteur depend alors de son integration en phase dans une unite de transcription active. Nous avons mene cette etude en electroporant independamment, dans des cellules es ck, deux types de vecteur de piegeage (phleal et psabetageo), chacun constitue d'une fusion entre le gene lacz et un gene conferant la resistance a un antibiotique, soit la phleomycine, soit la neomycine. L'activite du gene rapporteur reflete celle du gene endogene dans lequel l'integration a eu lieu et nous a donc permis d'etudier le profil d'expression des genes pieges dans des embryons chimeres aux jours 8,5 et 10,5 de developpement. En utilisant la capacite des cellules es a coloniser la lignee germinale des animaux chimeres et dans le but d'observer, in vivo, l'effet de la mutation d'insertion et d'evaluer le role du gene piege dans le developpement embryonnaire, nous avons etabli 20 lignees transgeniques independantes a partir des clones cellulaires pour lesquelles une expression du gene rapporteur avait ete mis en evidence au cours dudeveloppement. Enfin, mettant a profit la formation de messagers hybrides entre la region 5' du messager endogene et la construction-piege, il est possible de cloner le gene piege par 5' race pcr, (rapid amplification of cdna ends). Nous avons ainsi caracterise sur le plan moleculaire le gene piege dans la lignee phleal tl15, gene qui est exprime majoritairement dans le systeme nerveux en developpement des le jour 9,5


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Informations

  • Détails : 179 P.
  • Annexes : 200 REF.

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  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-013085
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