Identification des modifications chimiques spontanees de l'interferon-gamma recombinant humain (rhu-ifn-gamma) et caracterisation structurale d'intermediaires stables de repliement

par HUU-NGUYEN ROBERT THAI

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de C. VITA.

Soutenue en 1996

à Paris 11 .


  • Résumé

    Cette these rassemble les resultats de caracterisation biochimique de quatre derives de stabilite (denommes analogues 1, 2, 3 et derive 4), isoles pendant la phase de production de l'interferon-gamma humain recombinant (ru 42369). La nature de la modification chimique a ete elucidee chez deux de ces derives: l'analogue 2 est issu d'une desamidation de l'asparagine-25 en aspartate ; l'analogue 3 est le produit d'un clivage de l'extremite c-terminale de la cytokine, entre les residus arginine 139 et 140. Aucune de ces deux alterations n'a de repercussion ni sur les structures tridimensionnelles, ni sur l'activite antivirale de la cytokine. L'ensemble des resultats de caracterisation biochimique de l'analogue 1 suggerent que ce derive est aussi un produit de desamidation du ru 42369. La localisation et l'identification du (des) residu(s) modifie(s) est en cours. Le derive 4 du ru 42369 est un dimere covalent de la cytokine. La cartographie peptidique montre que le pontage covalent est localise sur des sites distincts. Cependant, dans les deux populations de derive 4 que nous avons isolees, le pontage est assure par un meme lien moleculaire de 75 da entre la chaine laterale de deux residus de lysine de deux sous-unites opposees. L'identite de cet agent pontant reste a etre elucidee. Les consequences structurales et fonctionnelles du pontage sont negligeables. Lors du suivi de la renaturation du ru 42369 a partir d'un schema de purification de la proteine par chromatographie en phase inverse, nous avons pu mettre en evidence des intermediaires de repliement de structure similaire au globule fondu (molten globule). Les resultats preliminaires de caracterisation spectroscopique de ces etats structuraux particuliers sont egalement rapportes. L'etude de ces intermediaires peut permettre de mieux comprendre la propension de l'interferon-gamma a s'agreger et d'ameliorer la renaturation de la proteine lors des procedes de purification


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Informations

  • Détails : 220 P.
  • Annexes : 295 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-013084
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