Contribution a l'etude fonctionnelle de l'apolipoproteine aii humaine : peptides synthetiques, modeles cellulaires et transgeniques

par CLAIRE BENETOLLO

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de ATHINA KALOPISSIS.

Soutenue en 1996

à Paris 6 .

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  • Résumé

    L'apolipoproteine aii (apo aii) est la deuxieme apolipoproteine constitutive des hdl apres l'apo ai. Alors que l'apo ai et les hdl ont un role anti-atherogene, la fonction de l'apo aii est inconnue. Pour pouvoir decrypter les relation structure/fonction de l'apo aii humaine, l'incidence des modifications post-traductionnelles et l'influence de l'apo aii sur les differentes activites enzymatiques qui regissent le transport inverse du cholesterol, nous avons utilise plusieurs approches. L'etude des proprietes physico-chimiques de l'apo aii montre que son domaine c-terminal est responsable de la liaison aux lipides. De plus, la troisieme helice de la proteine est suffisante pour deplacer l'apo ai des complexes phospholipidiques et par la meme d'empecher l'activation de la lcat par l'apo ai. Dans un deuxieme temps, nous avons confirme la specificite hepatique du promoteur de l'apo aii humaine en produisant des souris transgeniques exprimant le gene rapporteur cat sous son controle. Nous avons aussi montre que l'organisation chromatinienne du gene dans le foie et l'intestin etait responsable des differences expressions. Enfin, nous avons mis en evidence une augmentation de la transcription de l'apo aii au cours du developpement et lorsque les souris etaient soumises a un regime hyperlipidique. Par ailleurs, nous avons construit une apo aii mutee dans laquelle le premier intron a ete delete. En supprimant l'intron qui comporte un silencer, nous esperons obtenir une expression satisfaisante de l'apo aii car ce modele transgenique servira ensuite a l'etude des mutants de structure. Dans un troisieme temps, nous avons cherche a caracteriser les formes glycosylees et deglycosylees de l'apo aii a l'aide d'inhibiteurs du trafic intracellulaire : le cccp et la brefeldine a qui empechent le passage regolgi et la monensine qui empeche la secretion de la proteine. Nous apportons la premiere preuve directe que l'apo aii est une o-glycoproteine. Avec le cccp, nous observons une degradation intracellulaire couplee a une inhibition de la synthese proteique ainsi que l'apparition de la dimerisation de l'apo aii de facon precoce dans le re. Les inhibiteurs sont ensuite utilises pour mettre en evidence les isoformes de l'apo aii. Avec le cccp et la monensine, nous voyons apparaitre un doublet et un triplet sur sds page que nous supposons etre les formes glycosylees de l'apo aii.


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Informations

  • Détails : 350 P.
  • Annexes : 315 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : T Paris 6 1996 763
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1996
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