Etude structure/fonction d'un fragment de collagene et de la collagenase d'hypoderma lineatum

par KARINE MERIGEAU BENATAR

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Arnaud Ducruix.

Soutenue en 1996

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Le collagene represente 25% des proteines chez les mammiferes et seules les collagenases, qu'elles appartiennent a la famille des metalloproteases ou des proteases a serine, sont capables de le couper dans les conditions physiologiques. Parmi les 19 types de collagenes caracterises a ce jour, le collagene de type vi, compose de trois chaines polypeptidiques 1, 2 et 3, est le seul a former des filaments dits perles par un processus d'autoassociation remarquable. Nous avons etudie par cristallographie le fragment c5 du domaine globulaire c terminal de la chaine polypeptidique 3 du collagene de type vi qui presente 40% d'identite l'appi (amyloid- protein precursor inhibitor). La structure cristallographique de ce fragment c5 a ete resolue par remplacement moleculaire a la resolution de 1,6a puis affinee en utilisant des facteurs de temperature anistropes (shelxl-93) a 1,2a de resolution. Le facteur d'accord final est de 13,6% pour 10762 reflexions superieure a 4. La structure tridimensionnelle montre un repliement appartenant a la famille des inhibiteurs de proteases a serine de type kunitz. Des tests biochimiques ont montre que le fragment c5 ne possede pas d'activite inhibitrice envers les proteases a serine. Sur la base de la structure tridimensionnelle, nous avons propose quelques mutations permettant de restaurer l'activite inhibitrice. Des travaux recents de mutagenese dirigee realises sur un triple mutant asp, thr, phe ont confirme la validite de nos hypotheses. La deuxieme partie de cette these a ete consacree a l'etude de la collagenase (pm 25000 da) d'hypoderma lineatum. Elle est extraite du varon parasite du betail responsable de l'hypodermose. Lorsque nous avons aborde ce travail, aucun substrat ni inhibiteur synthetique n'etait connu. Nous avons caracterise deux substrats synthetiques, ce qui nous a permis de mettre en evidence trois inhibiteurs synthetiques. Par ailleurs, nous avons demontre les proprietes auto-inhibitrice de la collagenase due a la presence d'un coude (31-44) qui peut penetrer dans le site actif. Le dodecapeptide synthetique correspondant a cette structure secondaire a ete synthetise et son activite inhibitrice demontree. Par ailleurs, des anticorps polyclonaux produits contre ce peptide reconnaissent la collagenase. Nous avons clone la collagenase d'hypoderma lineatum dans e. Coli permettant ainsi une etude de mutagenese dirigee.


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Informations

  • Détails : 303 P.
  • Annexes : 146 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1996
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