Triple-helices d'adn inter et intramoleculaires : extension des sequences cibles et roles biologiques

par THERESE DE BIZEMONT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Claude Hélène.

Soutenue en 1996

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Un oligonucleotide de synthese peut reconnaitre specifiquement un enchainement de bases puriques d'une double-helice oligopurine?oligopyrimidine et former ainsi une triple-helice locale, base moleculaire de la strategie anti-gene destinee a controler artificiellement l'expression d'un gene choisi. Afin d'elargir la panoplie des sequences cibles a des double-helices comportant une sequence oligopurine suivie sur le meme brin d'une sequence oligopyrimidine, nous avons concu un oligonucleotide saut de brins pouvant s'apparier alternativement avec les deux brins oligopurines. La stabilite de la triple-helice avec l'oligonucleotide saut de brins peut etre augmentee sans perte de selectivite (i) par addition de derives benzoepyridoindoles (bepi), ligands specifiques des triple-helices, (ii) par optimisation, sur l'oligonucleotide saut de brins, du nombre et de la nature des nucleotides permettant la traversee du grand sillon. Dans des plasmides surenroules negativement, des sequences oligopurine?oligopyrimidine possedant une symetrie en miroir sont susceptibles de se replier en une conformation particuliere de l'adn, l'adn-h comprenant une region en triple-helice intramoleculaire. Nous avons montre qu'il est possible d'etendre le nombre de sequences susceptibles de former l'adn-h a des sequences non oligopurine?oligopyrimidine et ne possedant pas de symetrie en miroir. Cette nouvelle conformation de l'adn comporte une triple-helice intramoleculaire saut de brins. Le role biologique de l'adn-h reste a determiner. Nous avons montre qu'une sequence oligopurine?oligopyrimidine en miroir, inseree entre le gene bla (conferant a l'hote la resistance a l'ampicilline) et son promoteur peut adopter une conformation adn-h in vitro sur le plasmide surenroule negativement. In vivo, dans des bacteries e. Coli en presence d'ampicilline, la sequence en miroir peut reguler la transcription du gene bla mais pas la replication plasmidique. Afin de survivre en presence d'ampicilline, certaines bacteries peuvent developper des mecanismes permettant d'adapter leur physiologie a la presence de sequences d'adn susceptibles, en changeant de conformation, d'interferer avec l'expression du gene bla, processus biochimique vital en presence de l'antibiotique.


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Informations

  • Détails : 327 P.
  • Annexes : 438 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1996
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