Contribution a l'etude des proteines d'assemblage (pa) du cortex surrenal et du cerveau bovins

par Saadia Erragh

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de Hadassa Weintraub.

Soutenue en 1996

à Paris 5 .


  • Résumé

    Dans cette etude, nous avons caracterise les proteines d'assemblage (pa) des vesicules mantelees (vm) du cortex surrenal tissu non neuronal et nous les avons comparees a celles du cerveau de bovins. Dans les vm du cortex surrenal, nous avons identifie pour la premiere fois, seulement deux pa, ap-1 et ap-2 appeles aussi adapteurs ha-i et ha-ii. Les proteines du manteau des vm (clathrine, ha-i et ha-ii) du cortex surrenal apparaissent plus fortement liees a la membrane vesiculaire que celles du cerveau et la presence de l'acide ethylene-diamine-tetra-acetique (edta) dans le milieu de deshabillage est absolument indispensable pour leur extraction. Apres la separation de la clathrine et des pa par chromatographie sur gel de filtration, la purification de ha-i et ha-ii est effectuee par chromatographie d'adsorption sur colonne d'hydroxyapatite. Contrairement au cerveau, ou la purification de ha-ii par chromatographie d'affinite de cla-sepharose est tres efficace, pour le cortex surrenal, cette methode ne l'est pas, car nous avons obtenu qu'un melange de ha-i et ha-ii enrichi en ce dernier. Pour la premiere fois, nous avons pu montrer que les ha-i et ha-ii du cortex surrenal sont des proteines d'assemblage pa comme celles du cerveau. En effet, elles possedent les deux fonctions qui les definissent a savoir : liaison a la clathrine cla et polymerisation de celle-ci en coats, semblables aux structures des vm, observees in vivo en microscopie electronique. Comme les adapteurs du cerveau, ceux du cortex surrenal sont des complexes heterotetrameriques semblables mais non identiques. Certaines de leurs sous-unites ont en electrophorese en gel de polyacrylamide en presence de dodecyl-sulfate de sodium (sds-page) des mobilites electrophoretiques legerement differentes. En sds-page, ha-i du cortex surrenal apparait forme de deux polypeptides, appele et '-adaptines, comigrant a 100-kda. Les adaptines correspondantes du cerveau et ' ont des mobilites differentes qui sont respectivement de 100 et 114-kda. Les deux autres bandes de 47 et 19-kda, faisant partie des sous-unites formant le tetramere sont identiques pour les deux tissus. Les complexes ha-ii du cortex surrenal et du cerveau apparaissent formes de deux adaptines #c et comigrant a 100-kda. Pour le cortex surrenal et contrairement au cerveau, la proteine d'assemblage ap-180 et l'adaptine #a de ha-ii n'ont pas ete immunologiquement identifiees. Contrairement au cerveau dont la proteine d'assemblage auxiline apparait en sds-page-uree comme une bande de 126-kda, dans le cortex surrenal cette pa n'a pas ete observee. La cinetique de proteolyse menagee par la trypsine des pa de cerveau et de cortex surrenal, montre en sds-page, comme deja observe pour le cerveau, deux groupes de fragments localises dans les regions de 63-58 et 40-30-kda. Ils peuvent correspondre respectivement au trunk et oreilles des adaptines de ha-i et ha-ii de deux tissus. Leur apparition est concomitante a la disparition des adaptines de deux tissus, par contre les pp47, pp50, pp19 et pp17 sont refractaires a l'enzyme. Par analogie au cerveau, les complexes ha-i et ha-ii du cortex surrenal pourraient aussi avoir une structure en deux domaines : le trunk pourrait correspondre au domaine n-terminal et les oreilles au domaine c-terminal de chacune des adaptines. Tous ces resultats suggerent une grande similitude structurale et fonctionnelle entre les deux adapteurs ha-i et ha-ii du cerveau et du cortex surrenal avec cependant quelques differences, qui pourraient refleter une specificite tissulaire.


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  • Détails : 1 vol. (115 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 98-115

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