Mise au point d'un procede d'isolement des cellules ftales presentes dans le sang maternel en vue de realiser un diagnostic prenatal non invasif de maladies genetiques

par MURIEL ROCHE

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de Bernard Rossi.

Soutenue en 1996

à Nice .

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  • Résumé

    Le projet consistait a developper un procede permettant de realiser le diagnostic prenatal non invasif de n'importe quelle maladie genetique (defaut chromosomique) a partir d'un simple echantillon de sang maternel. Des anticorps monoclonaux specifiques des cellules trophoblastiques (gb17 et gb25), ont permis le developpement et l'evaluation de differentes methodes de separation des cellules ftales presentes dans la circulation peripherique maternelle. De l'ensemble des experiences, il ressort que seules la depletion des leucocytes maternels par panning (avec l'anticorps cd44) et la selection positive avec des billes magnetiques dynal (revetues des anticorps gb17 et gb25) ont permis de mettre en evidence par hybridation in situ, des cellules ftales parmi les cellules selectionnees. Mais ces procedes de separation cellulaire s'averent inutilisables en routine pour un depistage a grande echelle dans la mesure ou la majorite des cellules ftales sont perdues au cours du processus de purification. Sur la base de ces resultats, nous avons developpe une methode totalement differente qui ne necessite aucune purification prealable de cellules ftales mais leur simple reconnaissance dans la masse des cellules maternelles (1 cellule sur 1 million environ). Pour cela, nous avons adapte une technique qui permet simultanement l'immunomarquage d'antigenes membranaires et/ou cytosoliques des cellules ftales et l'identification de leurs chromosomes par hybridation in situ. L'immunofish, valide sur un modele cellulaire et applique aux cellules d'une femme enceinte porteuse d'un ftus male, a permis de visualiser des cellules ftales doublement marquees. Cette technique doit maintenant etre validee sur un grand nombre d'echantillons cliniques, mais semble tout a fait applicable a la recherche d'evenements rares comme la presence de cellules ftales dans la circulation maternelle.


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Informations

  • Détails : 221 P.
  • Notes : CONFIDENTIEL
  • Annexes : 264 REF.

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