Etude genetique de la region du controle de l'operon arginine de la bacterie thermophile bacillus stearothermophilus

par ALEXEI SAVTCHENKO

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de V. SAKANYAN.

Soutenue en 1996

à Nantes .


  • Résumé

    La voie de biosynthese de l'arginine a ete choisie pour analyser, chez une bacterie thermophile, bacillus stearothermophilus, les mecanismes de regulation qui sont encore tres mal connus chez ce type de microorganismes. Nous avons d'abord clone la partie proximale du groupe de genes argcjbd de b. Stearothermophilus dans e. Coli. Nous avons montre qu'en amont du gene argc existait un promoteur parg qui chevauche l'operateur dont la sequence presente une forte homologie avec la region de controle des genes arg de b. Subtilis. La fonctionnalite de cet operateur avec le represseur ahrc de b. Subtilis a ete prouvee in vivo et le site d'interaction a ete precise in vitro par des techniques de gel-shift et de footprinting a la dnasei. Nous avons reconstruit dans e. Coli l'ensemble du groupe de genes argcjbd de b. Stearothermophilus sous le controle de son propre promoteur et en presence du represseur ahrc. Les resultats obtenus permettent d'etablir que les genes argcjbd de b. Stearothermophilus sont organises en un operon dont l'expression est gouvernee par un promoteur particulierement fort. L'expression du gene argc dans e. Coli via ce promoteur peut atteindre 40% des proteines totales. L'analyse de differentes mutations portant sur la region du promoteur parg nous a permis de mettre en evidence le role essentiel joue dans la forte activite transcriptionnelle par une region riche en residus at situee en amont du site -35. En placant chacun des genes arg sous le controle des promoteurs forts, parg ou ptac, nous avons pu montrer que c'est l'expression du gene argj codant pour la n-ornithine acetyltransferase qui est nefaste pour la cellule hote (e. Coli). L'operon heterologue arginine a alors pu etre stabilise chez e. Coli grace a deux strategies: (i) en placant le promoteur fort parg sous le controle de son represseur specifique ; (ii) en attenuant la force du promoteur par deletion de la sequence riche en at situee en amont du site -35


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  • Détails : 142 P.
  • Annexes : 294 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Nantes. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 96 NANT 2054
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