Etude de la β-1,3-glucane synthase de Pyricularia oryzae (Magnaporthe grisea)

par Laurent Thannberger

Thèse de doctorat en Sciences. Microbiologie

Sous la direction de Michel Fèvre.

Soutenue en 1996

à Lyon 1 .

Le président du jury était Michel Fèvre.


  • Résumé

    Le beta-1,3-d-glucane est un constituant essentiel de la paroi cellulaire des champignons, synthetise chez les vegetaux principalement dans la fonction cicatricielle (callose). L'enzyme qui le synthetise, joue un role important dans la croissance mycelienne et peut etre une cible interessante pour des fongicides. La beta-1,3-d-glucane synthase (ec 2. 4. 1. 34) de pyricularia oryzae, champignon responsable de la fletrissure du riz, a ete caracterisee. Nous avons dans un premier temps mis au point un protocole d'extraction des membranes par des centrifugations fractionnees. L'enzyme a ensuite ete solubilisee a l'aide du detergent polyoxyethylene ether w1. Le produit synthetise a ete identifie par digestion a l'aide d'hydrolases specifiques, puis par chromatographie. En conditions optimales, l'activite specifique de l'extrait enzymatique partiellement purifie peut atteindre 10 nmoles de glucose incorporees / mg de proteines / minute. Les etudes biochimiques ont montre les caracteristiques de regulation du systeme enzymatique: l'activation par les ions calcium et magnesium, l'activation par les nucleotides triphosphates a faible concentration (gtp 10#-#8m, atp 10#-#6m) et l'absence de forme zymogene. L'importance de la partie lipophile des molecules inhibitrices a ete montree en etudiant l'inhibition par les detergents de la famille de l'octylglucoside. La fraction enzymatique solubilisee, puis purifiee par centrifugation en gradient de densite, a ete analysee par electrophorese en condition denaturante. Les peptides de 32, 46 et 54 kda sont correles a l'activite et pourraient correspondre a des sous-unites du complexe enzymatique. Une banque d'adn genomique en phage de p. Oryzae a ete construite. Un fragment du gene etg1 de s. Cerevisiae, codant pour une proteine membranaire impliquee dans la synthese de beta-1,3-glucane, a ete amplifie par pcr et utilise comme sonde. Des experiences d'hybridation ont revele la presence de sequences homologues chez p. Oryzae. Le criblage de la banque genomique a permis d'isoler un clone, en cours de sous-clonage pour le sequencage


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Informations

  • Détails : 1 vol. (157 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 145-157

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
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