Stabilité et activité de couples antigène-anticorps bêta-galactosidase-anti-bêta-galactosidase sous pression : application à la séparation d'immunoaffinité

par Pascal Degraeve

Thèse de doctorat en Biologie et génétique moléculaires et cellulaires. Biotechnologie

Sous la direction de P. LEMAY.

Soutenue en 1996

à Toulouse, INSA .


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  • Résumé

    L'effet de hautes pressions hydrostatiques sur l'activite et la stabilite de deux couples antigene-anticorps a ete etudie. Les antigenes employes sont les beta-galactosidases d'aspergillus oryzae (de structure monomerique) et d'escherichia coli (de structure tetramerique). Des modulations de l'activite enzymatique des antigenes en fonction de la pression ont pu etre mises en evidence. La capacite a se lier a leur antigene d'anticorps polyclonaux relatifs aux deux beta-galactosidases employees n'a pas ete alteree par des cycles de pressurisation repetes. Cette grande stabilite des anticorps a permis d'effectuer des essais de desorption sous pression des deux beta-galactosidases avec differents supports d'immunoaffinite. Plus de 70% de la quantite de beta-galactosidase d'aspergillus oryzae initialement fixee sur des membranes d'immunoaffinite a ainsi pu etre recuperee apres 4 cycles de 15 minutes a 400 mpa et 4c. Ce resultat permet d'envisager l'emploi de la pression comme protocole d'immunodesorption pour cet antigene. Un tel procede permettrait a la fois d'allonger la duree de vie des supports d'immunoaffinite et d'eviter l'ajout d'agents chimiques qu'il faut ensuite eliminer. Des pressions superieures a 250 mpa conduisent a une inactivation de la beta-galactosidase d'escherichia coli qui serait la consequence de la dissociation de sa structure tetramerique. Quatre cycles de 15 minutes a 250 mpa et 4c n'ont permis de recuperer que 35% de la quantite de beta-galactosidase d'escherichia coli. La recuperation quantitative d'antigenes multimeriques sensibles a la pression necessiterait que des anticorps selectionnes en fonction de la sensibilite par rapport a la pression des interactions qu'ils etablissent avec leur antigene soient greffes sur support

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  • Détails : 187 p

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  • Bibliothèque : Institut national des sciences appliquées. Bibliothèque centrale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1996/389/DEG
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