Etude du mecanisme et du mode d'action de quelques glycosyle hydrolases

par Sylvie Armand

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de B. HENRISSAT.

Soutenue en 1996

à l'Université Joseph Fourier (Grenoble) .


  • Résumé

    L'etude du mecanisme et du mode d'action de plusieurs glycosyle hydrolases (cellulases, beta-xylosidase, chitinases et chitobiase) a ete abordee en utilisant differentes techniques (rmn, hplc, syntheses chimiques et chimioenzymatiques, cinetiques enzymatiques). Les substrats fluorescents synthetises ont permis d'etudier la structure du site actif de diverses cellulases fongiques et de remettre en question la classification generalement acceptee de ces enzymes en endo et exohydrolases. L'etude par rmn du mecanisme d'hydrolyse des liaisons glycosidiques par la xylosidase de thermoanaerobacterium saccharolyticum a permis de montrer que cette enzyme agit avec retention de configuration en position anomere. Une forte activite de transglycosylation compatible avec ce mecanisme a egalement ete mise en evidence. Cette propriete represente un potentiel considerable pour l'obtention de xylooligosaccharides dont la synthese par voie chimique reste difficile. Une technique generale de determination de la stereochimie d'hydrolyse enzymatique des liaisons n-acetyl-beta-d-glucosaminiques par hplc a ete mise au point et a permis d'etudier le mecanisme de sept chitinases (appartenant a deux familles differentes) et d'une chitobiase. Nous avons ainsi montre que le mecanisme est conserve dans chaque famille, mais que les deux familles agissent avec des mecanismes differents. Les resultats obtenus, conjointement a l'etude de l'inhibition de la chitobiase par des chitooligosaccharides partiellement n-desacetyles nous ont conduit a proposer un mecanisme dans lequel le groupement acetamido en c-2 fournit l'assistance nucleophile necessaire a la catalyse enzymatique. Ce mecanisme pourrait s'appliquer plus generalement a toutes les enzymes qui hydrolysent les liaisons n-acetyl-beta-d-glucosaminiques avec retention de configuration, comme par exemple le lysozyme du blanc d'uf

  • Titre traduit

    Study of the mechanism and mode of action of glycosyl hydrolases


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Informations

  • Détails : 246 P.
  • Annexes : 250 REF.

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