Role de la proteine ihf (integration host factor) dans la synthese des alginates chez pseudomonas aeruginosa

par INA DELIC-ATTREE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de P. VIGNAIS.

Soutenue en 1996

à Grenoble 1 .


  • Résumé

    Les souches de pseudomonas aeruginosa isolees de patients atteints de mucoviscidose ont habituellement un phenotype mucoide qui se traduit par la production d'exopolysaccharides visqueux appeles alginates. Pour verifier si le facteur de transcription integration host factor (ihf) est implique dans la regulation de la synthese d'alginates, la proteine ihf a ete purifiee a partir d'une souche de p. Aeruginosa (souche cha) isolee d'un patient atteint de mucoviscidose. A partir des sequences n-terminal et internes de la proteine les genes codant chacune des deux sous-unites, hima pour la sous-unite 6 et himd pour , ont ete clones et sequences. In vitro, l'ihf de p. Aeruginosa est capable de se fixer specifiquement sur le promoteur du gene cle de la synthese d'alginates, le gene algd. Par la technique d'echange allelique, nous avons mute le gene hima porte par le chromosome de cha. Les analyses en immunotransfert et en retardement sur gel confirment l'absence de la proteine ihf dans le mutant hima. L'activation du promoteur algd dans les conditions d'hyperosmolarite ou de limitation en azote est abolie dans les mutants deficients en ihf. On peut egalement observer une diminution de 50% de la production d'alginates par rapport, a la souche mucoide parentale, chez les mutants ihf. La fixation de la proteine ihf sur le second site de fixation, ihf site 2, situe dans la region transcrite non traduite de algd, permet la formation d'une courbure de l'adn. Une nouvelle proteine, algy, a ete purifiee a partir des extraits de p. Aeruginosa. Algy peut former un complexe avec la region aval du site ihf 2. Le gene codant pour algy a ete clone et sequence. La sequence deduite du gene presente 63% d'acides amines identiques avec la proteine cysb d'escherichia coli, membre de la superfamille lysr des regulateurs de transcription. Nous proposons que algy puisse agir sur la transcription du gene algd soit directement comme activateur de transcription sur le promoteur palgd, soit indirectement en modifiant le superenroulement de l'adn


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  • Annexes : 163 REF.

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