Utilisation de la spectrometrie de masse electrospray pour l'etude structurale des proteines

par Philippe Guy

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de C. Dupuy.

Soutenue en 1996

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Nous decrivons les progres recents de la spectrometrie de masse dans l'etude structurale des proteines. Nos etudes associent la degradation chimique d'edman, les hydrolyses enzymatiques et les analyses par esims pour resoudre des problemes specifiques a la caracterisation de la structure primaire des proteines. Ainsi nous montrons qu'il est possible de preparer des sels d'ammonium quaternaires d'isothiocyanates par synthese chimique et de les utiliser dans les conditions de la degradation d'edman. La detection des produits resultants est realisee par esims afin d'ameliorer la sensibilite et d'assurer la caracterisation de certains residus. La connaissance de la structure primaire des proteines nous a conduit a l'etude de la localisation des ponts disulfures, responsables en partie du maintien de la structure tridimensionnelle des proteines. Une approche nouvelle utilisant la tris-(2-carboxyethyl) phosphine pour la reduction des ponts disulfures et le n-hydroxymethyl benzamide comme methode d'alkylation des cysteines libres en milieu acide est presentee. Apres avoir realise une etude comparative de peptides lies a l'aide d'un pont disulfure par sm avec divers modes d'ionisation, nous avons identifie ceux des puroindolines a et b de ble. Enfin, par esims, nous avons obtenu des renseignements sur la stabilite et la conformation des cytochromes c#2 et c#5#5#3 sauvages et mutes. Nous avons mis en evidence la presence de plusieurs conformeres de proteines par observation de la distribution des etats de charges et par la mesure des echanges isotopiques (h/d). Nous avons ainsi classe en fonction de leur stabilite, les mutants des deux cytochromes par rapport aux types sauvages. De plus, nous avons mis au point et realise l'etude des sites de deuteriation des hydrogenes amidiques du squelette polypeptidique. Celle-ci utilise les echanges isotopiques suivis d'une digestion rapide par la pepsine permettant d'obtenir des informations locales sur la penetration du solvant deuterie dans la proteine


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  • Détails : 237 P.
  • Annexes : 239 REF.

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