Application de l'électrophorèse d'affinité avec ions métalliques immobilisés à l'étude de la relation structure/fonction des protéines natives et modifiées

par Won-Ok Lee

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, bioconversion, microbiologie

Sous la direction de Mookambeswaran A. Vijayalakshmi.


  • Résumé

    L'électrophorèse d'affinité avec ions métalliques immobilisés (IMAGE) peut être appliquée comme outil analytique du changement de disponibilité des histidines de surface qui résulte de changements subtils de structure tridimensionnelle de la protéine. Notre première étude avec l'IMAGE a été faite sur la ribonucléase bovine pancréatique native et glycosylée. La RNase A glycosylée par la voie chimique a montré une forte augmentation de la stabilité thermique, pourtant la résistance à la protéolyse n'a pas varié par rapport à la RNase A native. Pour l'affinité avec l'IDA-Cu(ll) a été légèrement augmentée par comparaison à l'enzyme native. Dans la deuxième partie, les deux différentes formes dimériques, MxM et M=M de la ribonucléase bovine séminale (BS-RNase) peuvent être séparés par IMAGE. La BS-RNase (MxM) a montré plus forte affinité avec les ions métalliques que les autres structures protéiques. Cette différence d'affinité entre MxM et M=M pour les ions métalliques immobilisés peut être due au changement conformationnel résultant d'échange du segment N-terminal (résidus 1 - 17) entre les deux sous-unités. La troisième étude concerne la séparation de la phosphatase acide prostatique (PAP) native, dénaturée et renaturée par IMAGE. La PAP renaturée possède une conformation différente de la PAP native malgré qu'elle aie 70 % de son activité initiale. Une meilleure résolution de ces trois enzymes a été obtenue avec le tampon MOPS par rapport au Tris. Néanmoins, la résolution des différentes PAP est meilleure avec l'augmentation du gradient de Tris. Cela peut être expliqué par le fait que le Tris convertit des interactions de type multi-sites en des interactions de type mono-site entre protéines et chélates d'ions métalliques. L'IMAGE est une méthode très utile afin d'étudier le changement subtil de la structure tridimensionnelle protéique après une petite modification protéique in vivo ou in vitro.

  • Titre traduit

    Appliation of immobilized metal affinity gel electrophoresis on the study of structure/function relationship of native and modified proteins


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Informations

  • Détails : 1 vol. (143 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 116 réf.

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  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1996 BAE 909

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  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : 1996COMPD909
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