Contribution a l'etude de la gpx5, une proteine de l'epididyme de souris apparentee aux glutathion peroxydases : production in vitro et caracterisation de la proteine ; proprietes fonctionnelles ; distribution en fonction de differentes conditions physiologiques

par Patrick Vernet

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de J.-P. DUFAURE.

Soutenue en 1996

à Clermont Ferrand 2 .

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  • Résumé

    La maturation des spermatozoides est un phenomene controle en partie par la synthese et la secretion de proteines specifiques de l'epididyme. Parmi les nombreuses proteines produites dans cet organe, gpx5 a fait l'objet de ce travail. Le sequencage de l'adnc de gpx5 a permis d'affilier cette proteine aux glutathion peroxydases (gpx) impliquees dans le metabolisme de certains hydroperoxydes. Pourtant, gpx5 ne contient pas la selenocysteine du site actif des gpx. Cette particularite a conduit a tester l'activite enzymatique de gpx5. Tout d'abord, l'etablissement de cellules exprimant constitutivement gpx5 a permis de caracteriser l'activite gpx de la proteine vis a vis d'h#2o#2. De plus, gpx5 confere aux cellules une protection contre les hydroperoxydes. Une production plus importante de gpx5 par un baculovirus recombinant a ete entreprise. La concentration optimale en glutathion reduit est de 3mm et le ph egal a 8,5 pour le fonctionnement de gpx5. De plus, les hydroperoxydes d'acides gras et de phosphatidylcholine sont metabolises. La purification de la proteine a ete realisee a 80%. Par immunohistochimie, gpx5 apparait essentiellement localisee dans la lumiere du canal epididymaire apres synthese et secretion par les cellules epitheliales de la tete de l'epididyme. Elle est associee aux spermatozoides jusqu'aux voies genitales femelles. La stabilite et le transport de gpx5 apparaissent sous la dependance des androgenes et de facteurs testiculaires. Le comportement de l'arnm de gpx5 a ete etudie au cours de carences nutritionnelles. L'accumulation de ces derniers est modulee par la teneur en selenium. Dans l'epididyme, les arnm de gpx5 sont augmentes de 77% apres une carence en selenium. Par contre, le magnesium et le cuivre n'ont aucun effet sur l'accumulation de ces arnm. Enfin, l'evolution des arnm de gpx5 au cours du vieillissement montre un pic a 50 jours puis decroit jusqu'a 18 mois


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  • Détails : 138 P.
  • Annexes : 383 REF.

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