Production d'anticorps anti-steroides-mutagenese des paratopes

Production of anti-steroid antibodies and paratope mutagenesis

• Auteur / Autrice : Jacques Fieschi
• Direction : Daniel Baty
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2

Résumé

Les specificites des deux anticorps anti-cortisol ont ete modifiees par mutagenese. Les genes codant pour les anticorps ont ete introduits dans un vecteur d'expression procaryote sous controle d'un promoteur inductible. Les fragments d'anticorps produits forment des corps d'inclusion insolubles. Une fusion a ete realisee entre un fragment d'anticorps et la mbp (proteine affine du maltose) mais la proteine est egalement insoluble. Par contre, cette fusion est presente dans le milieu de culture sous une forme soluble et active quand elle est exprimee dans une souche dont les proteines periplasmiques sont liberees dans un milieu extra-cellulaire. La mutagenese des paratopes ne peut pas etre envisagee sur l'ensemble des boucles hypervariables (cdr). Des donnees structurales, obtenues par d'autres anticorps ont permis la modelisation des paratopes. Il a ainsi ete possible de reduire le nombre d'acides amines a modifier. Une nouvelle methode a ete mise au point. Elle a permis l'introduction de mutations dans plusieurs cdr en isolant un fragment d'adn simple brin utilise comme amorce. La banque de mutants obtenue a partir des anticorps anti-cortisol a ete introduite dans un vecteur phagemidique et exprimee a la tete des bacteriophages. La banque de phages a ete criblee sur l'estradiol qui n'est pas reconnu par les anticorps initiaux. Il a ete possible d'isoler des clones qui ont acquis la capacite de reconnaitre l'estradiol. L'etude de la structure des nouveaux anticorps est possible grace a la production des proteines de fusion. Ces donnees devraient permettre de mieux comprendre comment une proteine interagit avec un steroide