Biocatalyse en milieu organique : étude comparative des propriétés de la lipase de Pseudomonas cepacia en milieu aqueux et en milieu organique

par Gaëlle Pencréac'h

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et microbiologie

Sous la direction de J. BARATTI.


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  • Résumé

    L'objectif de cette etude a ete de comprendre les differents parametres qui gouvernent l'activite lipasique en milieu organique. Dans un premier temps une nouvelle methode de mesure de l'activite lipasique en milieu organique a ete developpee. La reaction est l'hydrolyse d'un ester d'acide gras et de p-nitrophenol. Le p-nitrophenol forme est dose par colorimetrie a 410 nm apres extraction par une phase aqueuse alcaline. La comparaison des proprietes en milieu aqueux et organique de la lipase de pseudomonas cepacia purifiee a revele que le fonctionnement en milieu organique est caracterise par: une augmentation de la stabilite thermique, de la temperature optimale et de l'energie d'activation de la reaction, une faible modification de la specificite d'acide gras et une tres forte diminution de l'activite. Les precautions experimentales necessaires (elimination des limitations diffusionnelles, controle de l'activite thermodynamique de l'eau en milieu organique) ont ete prises. La diminution de l'activite en milieu organique par rapport au milieu aqueux est caracteristique des lipases relativement a d'autres classes d'enzymes. Pour 24 autres lipases, le rapport de l'activite en milieu organique et aqueux varie fortement. Cinq lipases sont plus actives en milieu organique qu'en milieu aqueux. La plupart des preparations enzymatiques contiennent des additifs qui influencent l'activite en milieu organique. Nous avons egalement etudie les proprietes de la lipase de p. Cepacia immobilisee sur polypropylene poreux (accurel ep-100). Globalement, les proprietes de la lipase ne sont pas modifiees apres immobilisation. Toutefois, l'activite specifique en milieu organique augmente d'un facteur 3. De meme, pour 18 autres lipases on observe une augmentation (entre 10 et 4300 fois) de l'activite apres immobilisation

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