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Thèse soutenue

Ciblage des protéases à cystéine par de nouveaux substrats et inhibiteurs peptidiques dérivés de leurs inhibiteurs naturels (cystatines). Application à la protéase à cystéine majeure de trypanosoma cruzi

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Auteur / Autrice : Carole Serveau
Direction : Francis Gauthier, Johan Hoebeke
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences de la vie. Biochimie
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Tours
Jury : Président / Présidente : Francis Gauthier
Rapporteurs / Rapporteuses : Joseph Gabriel Bieth, Roger Mayer

Résumé

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Les cathépsines lysosomiales B, H et L de mammifères, protéases à cystéine apparentées à la papaine, sont impliquées dans la dégradation protéique intracellulaire mais aussi dans des processus pathologiques. Le protozoaire trypanosoma cruzi exprime une protéase à cystéine homologue à la cathepsine L. Cette protéase, ou cruzipaine, est impliquée dans la pathologie de la maladie de chagas transmise par T. Cruzi. C'est une cible potentielle pour développer de nouvelles drogues anti-parasitaires. Sa caractérisation enzymatique par comparaison aux cathépsines mammaliennes est nécessaire pour définir un substrat ou un inhibiteur sélectif de la protéase parasitaire. Nous avons développé des substrats fluorogéniques et des inhibiteurs irréversibles à partir de deux régions principales (lvg et qxvxg) très conservées des cystatines (inhibiteurs naturels des protéases à cysteine), regions impliquees dans le mecanisme d'inhibition. Nous avons ainsi obtenu de nouveaux substrats et inhibiteurs sensibles et specifiques des enzymes apparentees a la papaine, adaptes pour la caracterisation comparée des protéases d'origine mammalienne et parasitaire. Contrairement aux cathépsines B et L, la cruzipaine est très sensible à la nature des résidus localisés au niveau de l'extrêmité carboxy-terminale du site de clivage, plus particulièrement une proline en p2'. Afin de développer des inhibiteurs peptidiques irréversibles, nous avons étudié la spécificité de la région p du site de clivage pour les cathépsines B et L, et la cruzipaine. La combinaison des résultats obtenus nous a permis de sélectionner une séquence peptidique (hpggp) sélective de la cruzipaine. A partir de cette séquence, un substrat fluorogénique sélectif de la cruzipaine est d'ores et déjà synthétisé et un inhibiteur irréversible est en cours de développement pour une utilisation potentielle sur des cultures parasitaires in vitro