Ciblage des proteases a cysteine par de nouveaux substrats et inhibiteurs peptidiques derives de leurs inhibiteurs naturels (cystatines). Application a la protease a cysteine majeure de trypanosoma cruzi

par CAROLE SERVEAU et F. GAUTHIER

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de J. HOEBEKE.

Soutenue en 1995

à Tours .

mots clés

Résumé

Les cathepsines lysosomiales b, h et l de mammiferes, proteases a cysteine apparentees a la papaine, sont impliquees dans la degradation proteique intracellulaire mais aussi dans des processus pathologiques. Le protozoaire trypanosoma cruzi exprime une protease a cysteine homologue a la cathepsine l. Cette protease, ou cruzipaine, est impliquee dans la pathologie de la maladie de chagas transmise par t. Cruzi. C'est une cible potentielle pour developper de nouvelles drogues anti-parasitaires. Sa caracterisation enzymatique par comparaison aux cathepsines mammaliennes est necessaire pour definir un substrat ou un inhibiteur selectif de la protease parasitaire. Nous avons developpe des substrats fluorogeniques et des inhibiteurs irreversibles a partir de deux regions principales (lvg et qxvxg) tres conservees des cystatines (inhibiteurs naturels des proteases a cysteine), regions impliquees dans le mecanisme d'inhibition. Nous avons ainsi obtenu de nouveaux substrats et inhibiteurs sensibles et specifiques des enzymes apparentees a la papaine, adaptes pour la caracterisation comparee des proteases d'origine mammalienne et parasitaire. Contrairement aux cathepsines b et l, la cruzipaine est tres sensible a la nature des residus localises au niveau de l'extremite carboxy-terminale du site de clivage, plus particulierement une proline en p2'. Afin de developper des inhibiteurs peptidiques irreversibles, nous avons etudie la specificite de la region p du site de clivage pour les cathepsines b et l, et la cruzipaine. La combinaison des resultats obtenus nous a permis de selectionner une sequence peptidique (hpggp) selective de la cruzipaine. A partir de cette sequence, un substrat fluorogenique selectif de la cruzipaine est d'ores et deja synthetise et un inhibiteur irreversible est en cours de developpement pour une utilisation potentielle sur des cultures parasitaires in vitro

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