Evolution de la béta-lactamase TEM-1

par Isabelle Saves

Thèse de doctorat en Pharmacologie et toxicologie

Sous la direction de J.-M. MASSON.

Soutenue en 1995

à Toulouse 3 .


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    Les beta-lactamines (penicillines et cephalosporines) representent soixante pour-cent des antibiotiques administres. Le mecanisme majeur de resistance a ces antibiotiques est la production d'enzymes periplasmiques, les beta-lactamases, inactivant les antibiotiques par hydrolyse du cycle beta-lactame. La beta-lactamase tem-1 est tres largement repandue dans les differentes especes bacteriennes. Elle hydrolyse tres efficacement les penicillines, mais pas les cephalosporines de troisieme generation, et elle est sensible a l'inhibition par l'acide clavulanique. Cependant, elle evolue rapidement. La substitution d'un petit nombre d'acides amines peut lui permettre d'hydrolyser les cephalosporines, ou de devenir resistante aux inhibiteurs. Le mecanisme d'hydrolyse des substrats comprend une etape d'acylation de la serine catalytique par le cycle beta-lactame, puis une etape de deacylation liberant l'enzyme native et l'antibiotique degrade. Dans un premier temps, une methode de determination des constantes de vitesses elementaires d'acylation et de deacylation a ete mise au point, en couplant la spectrophotometrie et la spectrometrie de masse par ionisation electrospray. Dans un deuxieme temps, cette methode, combinee a l'etude cinetique classique, a permis la comparaison des vitesses d'hydrolyse des penicillines et des cephalosporines par l'enzyme sauvage et des mutants naturels. Cette demarche combinee a la determination cristallographique de la structure tridimensionnelle de mutants, et a la modelisation moleculaire, a partir de la structure de tem-1, a permis de mettre en evidence le role essentiel de la boucle omega, formant un cote du site actif, dans l'evolution de tem-1 vers l'hydrolyse des cephalosporines de troisieme generation. D'une facon similaire, l'etude cinetique de tem-1 et de mutants resistants a l'inhibition, la spectrometrie de masse, la modelisation moleculaire et le calcul electrostatique, ont ete combines afin de confirmer differentes hypotheses sur le mecanisme d'inhibition de tem-1, puis d'expliquer le mecanisme d'evolution de tem-1 vers la resistance a l'inhibition

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 234 f.-[112] p. de pl

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1995TOU30206
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.