Selection et caracterisation de mutants de la voie de biosynthese des sterols chez arabidopsis thaliana (l. ) heynh. Isolement d'un adnc codant une delta-sept-c-cinq-desaturase par la complementation fonctionnelle heterologue d'un mutant de levure par une banque d'adnc d'arabidopsis thaliana

par DANIEL GACHOTTE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de P. Benveniste.

Soutenue en 1995

à Strasbourg 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Le mutant ste 1 a ete isole par le criblage d'une population de 22500 plantes issues d'une mutagenese-ems base sur l'analyse des sterols de feuille par chromatographie en phase gazeuse. Le profil biochimique de ste 1 est caracterise par l'accumulation de trois <#7-sterols liee a la diminution des trois <#5-sterols correspondant qui sont les produits de fin de chaine biosynthetique contenus dans les feuilles sauvages. Les structures de ces <#7-sterols ont ete determinees par chromatographie en phase gazeuse couplee a la spectrometrie de masse et par la resolution de spectre obtenu par resonance magnetique nucleaire du proton d'un sterol, apres purification par hplc. Cette accumulation de <#7-sterols suggere que le mutant est deficient au niveau de l'etape de c5-desaturation. L'analyse genetique montre que l'accumulation de <#7-sterols est due a une mutation unique, nucleaire et recessive. Un gene de levure, erg 3, codant pour la <#7-sterols-c5-desaturase a ete introduit dans les racines de plantes sauvages et ste 1 par l'utilisation du plasmide ti et d'agrobacterium tumefaciens. L'analyse biochimique de tissus transgeniques, obtenus de racines ste 1, montrent une augmentation des <#5-sterols concomitante a une diminution des <#7-sterols en comparaison du profil sterolique du mutant ste 1. L'expression du gene erg 3 permet la complementation du mutant ste 1. Ce dernier resultat suggere fortement le fait que l'accumulation de <#7-sterols est liee a la deficience de la <#7-sterols-c5-desaturase dans la voie de biosynthese des <#5-sterols. La complementation fonctionnelle du mutant erg 3 de levure par une banque d'adnc d'arabidopsis thaliana a abouti au clonage du gene codant pour la <#7-sterol-c5-desaturase sauvage. Cette sequence est a la base de la caracterisation moleculaire du mutant ste 1

  • Titre traduit

    Selection and characterization of arabidopsis thaliana (l. ) heynh. Mutants in sterol biosynthesis. Isolation of a cdna encoding a delta-seven-c-five-desaturase by a heterologue functional complementation of a yeast mutant by an arabidopsis thaliana cdna library


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  • Détails : 217 P.
  • Annexes : 289 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.1995;2078
  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : H 503.000,1995
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