Etudes structurales et fonctionnelles de l'arn polymerase ii humaine

par JOEL ACKER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de C. KEDINGER.

Soutenue en 1995

à Strasbourg 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Nous avons clone les adnc et/ou les genes codant pour 7 sous-unites de l'arn polymerase ii humaine: hrpb1 (220 kda), hrpb2 (133 kda), hrpb6 (14,4kda), hrpb8 (17,1kda), hrpb9 (14,5kda), hrpb10 (7 kda) et hrpb10b (7,6 kda). Les genes codant pour deux de ces sous-unites, hrpb9 et hrpb10 ont ete isoles. Les genes correspondant a 6 de ces sous-unites ont ete localises par hybridation in situ et se situent sur des chromosomes differents. Les adnc de chacun de ces polypeptides ont ete inseres dans differents vecteurs d'expression eucaryotes et procaryotes. Le taux d'expression et la solubilite des produits d'expression (proteines de fusion ou non) ont ete evalues en vue d'une etude fonctionnelle des differentes sous-unites. Nous avons montre dans des experiences d'expression transitoire, que la sous-unite hrpb6 est phosphorylee sur la serine en position 2. La fonction de cette phosphorylation n'est pas connue a ce jour. Des experiences de complementation heterospecifique ont permis de demontrer que trois sous-unites communes aux trois classes d'arn polymerase humaines, hrpb6, hrpb10 et hrpb10b, sont capables de remplacer leurs homologues de levure in vivo et de restaurer une polymerase fonctionnelle. La coinfection de cellules sf9 par des baculovirus recombinants nous a permis de caracteriser des contacts entre differentes sous-unites de l'enzyme. Les resultats obtenus font apparaitre un role structural central pour les sous-unites hrpb3 et hrpb5. Des sous-complexes de l'arn polymerase ii humaine, composes de hrpb1, hrpb2, hrpb3 et hrpb5, peuvent etre obtenus par coinfections de baculovirus recombinants exprimant ces polypeptides. Ces premieres experiences, qui montrent qu'un complexe multiproteique stable peut etre assemble, suggerent que la reconstruction d'une arn polymerase fonctionnelle doit etre possible

  • Titre traduit

    Structural and functional study of eukaryotic rna polymerase ii


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Informations

  • Détails : 107 P.
  • Annexes : 380 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.1995;2051
  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : H 503.000,1995
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