Contribution à l'étude de la réponse au froid chez le colza (Brassica napus) : identification, caractérisation et analyse de la régulation de deux transcrits qui s'accumulent à 4 degré C

par Julio Saez-Vasquez

Thèse de doctorat en Physiologie et biologie moléculaires végétales

Sous la direction de M. DELSENY.

Soutenue en 1995

à Perpignan .


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  • Résumé

    Nous avons prepare une banque d'adnc dans le vecteur l-zapii a partir des arnm des plantules de colza (c. V. Samourai) exposees au froid (4c, 2 jours), puis par criblage differentiel, nous avons isole deux clones correspondant a deux nouveaux genes regules par le froid, pbnc10 et pbnc24. L'analyse et la comparaison des sequences de ces deux clones avec les banques de donnees ont montre que pbnc10 code pour une proteine homologue des phosphoenolpyruvate carboxykinases (pepck ; ec 4. 1. 1. 49) de levure (saccharomyces cerevisiae), trypanosome, rhizobium sp. Et e. Coli. D'autre part la sequence proteique deduite du clone pbnc24 montre des homologies avec un gene humain qui est fortement exprime dans les cellules des tumeurs benignes du sein (bbcl, breast basic conserved). Chez brassica napus les genes bnpepck et bnc24 sont membres de petites familles multigeniques. Une analyse par hybridation selon southern en utilisant l'adn genomique a la fois de b. Napus, et de deux especes parentales, b. Campestris et b. Oleracea, suggere la presence d'au moins deux genes homologues bnpepck et bnc24 par genome. Les transcrits bnpepck et bnc24 s'accumulent en quelques heures a 4c et retournent a leur niveau initial lorsque les plantules sont remises a 22c (temperature ambiante). D'autre part des analyses par immuno-empreinte montrent que les niveaux de la proteine bnpepck sont correles a l'accumulation des transcrits bnpepck. Au contraire, le meme type d'experience revele que les niveaux de la proteine bnc24 ne changent pas pendant la periode de traitement au froid. Nous avons demontre par immuno-empreinte sur des extraits de proteines preparees a partir de noyaux isoles que bnc24 est une proteine nucleaire. En realisant la fusion de la partie n-terminale de bnc24 avec la proteine gus puis des experiences de bombardement sur des epidermes d'oignon nous avons obtenu des evidences indiquent que cette region est suffisante pour l'adressage nucleaire. Des experiences visant a comprendre le role de bnc24 ont consiste a introduire une construction sens ou antisens chez arabidopsis. Les premiers resultats en sont discutes

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  • Bibliothèque : Université Perpignan Via Domitia. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH 1995 SAE
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