Etude du site actif de la malate deshydrogenase a nadp de sorgho

par MARTINE LEMAIRE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de P. DECOTTIGNIES.

Soutenue en 1995

à Paris 11 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Chez le sorgho, la malate deshydrogenase a nadp (mdh a nadp, ec 1. 1. 1. 82) est un enzyme cle de la voie d'incorporation du co#2 atmospherique. Le sujet de cette these a consiste a etudier son site actif par mutagenese dirigee et par derivation chimique. Le site de fixation du nadph a ete etudie par une approche chimique en utilisant des analogues arylazido-aminobutyryl du cofacteur. Les experiences realisees ont montre que ces analogues sont des inhibiteurs competitifs du nadph et que, apres une forte irradiation, ils se fixent de facon covalente au site du cofacteur. Des experiences preliminaires de localisation de ce site de fixation ont ete realisees. L'effet du diethylpyrocarbonate (depc) a ete teste sur l'activite de la mdh a nadp de sorgho. Les resultats obtenus montrent qu'une histidine est localisee au site actif cet enzyme. Apres coupure trypsique de la proteine traitee au depc, des analyses par sequencage et par spectrometrie de masse ont permis d'identifier l'histidine derivee (his229). Afin de preciser le role de ce residu dans l'activite de l'enzyme, il a ete remplace par mutagenese dirigee. Les proteines mutees sont totalement inactives demontrant que l'his229 joue un role primordial dans la catalyse de la mdh a nadp de sorgho. Une interaction de l'histidine du site actif avec un aspartate ayant ete suggeree par analogie avec les mdh a nad, le residu candidat a ce role (asp201) a ete remplace par une alanine ou une asparagine. Les proteines mutees ont des parametres cinetiques fortement modifies, indiquant que l'asp201 participe a la catalyse en interaction avec l'his229. Par ailleurs, il avait ete propose que la cysteine 175 forme une triade catalytique avec l'his229 et l'asp201. Une mdh mutee dans laquelle la cys175 a ete remplacee par une alanine a donc ete produite, mais elle presente des parametres cinetiques peu differents de ceux de l'enzyme non mute, ce qui indique que ce residu ne participe pas a la catalyse


  • Pas de résumé disponible.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 138 P.
  • Annexes : 144 REF.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-012523
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.