Regulation du cycle cellulaire : identification et caracterisation de proteines fonctionnellement liees a la kinase cdc28 de saccharomyces cerevisiae

par PATRICK ZARZOV

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de C. MANN.

Soutenue en 1995

à Paris 6 .


  • Résumé

    Le but de cette these est l'identification de cibles de la proteine kinase cdc28 de saccharomyces cerevisiae en utilisant un crible genetique consistant a rechercher des mutations coletales (letales synthetiques) avec cdc28. L'allele utilise pour ce crible est cdc28-109 qui montre a temperature restrictive un melange de cellules arretees en g1 et en g2. 16 mutants a la fois coletaux avec cdc28-109 a sa temperature permissive et ts a 37c dans un contexte cdc28 sauvage. Deux de ces mutants ont plus particulierement ete etudies. Ils sont tout deux affectes dans des genes deja connus: hsf1 et slt2(mpk1): hsf1 (heat shock factor 1) est le facteur de transcription implique dans la reponse cellulaire au choc thermique chez saccharomyces cerevisiae. Malgre l'absence de rapport evident entre hsf1 et la division cellulaire, l'etude par microscopie electronique du mutant a revele un role de hsf dans la duplication du spindle pole body. La separation par electrophorese bidimensionnelle des proteines totales du mutant hsf1 a montre que toutes les proteines de choc thermique (hsp) sont exprimees normalement chez le mutant a l'exception notable de la famille des hsp90. Ces proteines sont codees par le gene hsc82 exprime de facon constitutive et par le gene hsp82 inductible par la chaleur. De facon interessante seul le gene hsc82 a ete obtenu comme suppresseur extragenique multicopie du mutant hsf1. Ces resultats suggerent que les hsp90 sont impliquees dans la duplication du spb bien que des effets de hsf1 sur d'autres proteines ne puissent etre exclus. Le second mutant etudie est slt2. La caracterisation physiologique de ce mutant a ete publiee dans le journal of cell biology sous le titre the slt2(mpk1) map kinase homolog is involved in polarised cell growth in saccharomyces cerevisiae (vol. 123, n 6, part2, dec. 1993 1821-1833). Cette etude montre que slt2 est impliquee dans la polarisation de la croissance necessaire lors de la formation du bourgeon. Elle a ete completee par une etude biochimique de slt2. Ces experiences ont montre que l'activation de slt2 (par phosphorylation sur tyr) est regulee en fonction du cycle cellulaire avec un pic au moment de l'emergence du bourgeon. Slt2 est egalement activee par un traitement des cellules au facteur alpha. Ces resultats (publies dans embo journal, sous presse) suggerent que slt2 est activee aux moments ou la cellule polarise sa croissance: lors de l'emergence du bourgeon et pendant la formation de la projection consecutive au traitement par la pheromone de conjugaison. Comme pour hsf, nous ne savons pas encore si slt2 est directement activee par cdc28 ou si elle fait partie d'une voie agissant en parallele avec cdc28


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Informations

  • Détails : 232 P.
  • Annexes : 224 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1995
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