Caracterisations d'isoformes de carboxypeptidase a ainsi que d'un nouvel inhibiteur proteique endogene dans le cerveau

Characterizations of carboxypeptidase a isoforms, and a mammalian endogenous carboxypeptidase inhibitor in the brain

• Auteur / Autrice : EMMANUEL NORMANT
• Direction : J.-C. SCHWARTZ
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Les localisations, dans d'autres tissus que le pancreas, des isoformes cpa1 et cpa2 de la carboxypeptidase a (cpa, ec 3. 4. 17. 1) ont ete realisees. Trois approches differentes, permettant la recherche i) de l'activite enzymatique avec un substrat radiomarque, ii) des proteines, grace aux anticorps polyclonaux, ou iii) des transcrits codant pour ces proteines ont ete envisagees. Ces trois methodes ont apporte des resultats coherents et complementaires permettant, in fine, de definir de nouveaux organes, tels que le tractus digestif, le cur, le cerveau, le poumon et le testicule comme producteur de ces enzymes. Elles ont notamment permis de localiser les cellules nerveuses produisant la cpa1 au niveau des noyaux arque et supraoptique de l'hypothalamus. Elles ont egalement permis de caracteriser un transcrit court, provenant d'epissage alternatif du gene de la cpa2, et codant pour la forme mature de l'enzyme (sans son peptide d'activation), prive de ses 20 residus n-terminaux. L'activite enzymatique correspondante a ete caracterisee grace a l'obtention de la proteine recombinante, et detectee dans le cerveau. C'est une metallocarboxypeptidase, qui possede des constantes d'inhibition, vis-a-vis de certains inhibiteurs, differentes de celles de la cpa2 pancreatique. Enfin ces techniques ont permis de caracteriser et de localiser le premier inhibiteur proteique de mamifere de metallocarboxypeptidases. Cette proteine de 26 kda, est essentiellement localisee dans le cerveau, le poumon et l'estomac. Elle inhibe de facon quasi irreversible les cpa1 et cpa2 (mais pas la cpa2 forme courte) ainsi que la cpa mastocytaire et la cpb. L'adnc de son transcrit a ete clone et la proteine exprimee. Celle-ci ne possede aucune homologie avec les sequences des banques de donnees