Mr60, lectine specifique du mannose : caracterisation, clonage et regulation de l'expression

Mr60, a mannose specific lectin: characterization, cdna cloning and expression regulation

• Auteur / Autrice : Chantal Arar Plessis
• Direction : Annie-Claude Roche
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Orléans

Résumé

Une lectine intracellulaire et specifique du mannose, appelee mr60 a ete purifiee par chromatographie d'affinite a partir des membranes de cellules de la lignee myelomonocytaire humaine hl60 et promonocytaire u937. Sa masse apparente en gel d'electrophorese denaturant est de 60 000 en milieu reducteur et de 120 000 en milieu non reducteur. Des anticorps monoclonaux, diriges contre la proteine mr60 ont permis de localiser mr60 au niveau des vesicules intracellulaires autour du noyau. Afin de poursuivre l'etude moleculaire de cette nouvelle proteine specifique du mannose et d'elucider sa fonction, nous avons clone l'adnc complet de mr60. L'analyse de la sequence peptidique de mr60 deduite de l'adnc montre que: 1) il n'y a aucune analogie de sequence significative avec d'autres lectines connues ; 2) mr60 presente une structure en feuillets b, proche de la structure secondaire des galectines ; 3) mr60 est identique a ergic-53, une proteine membranaire, recemment clonee et localisee au niveau du compartiment intermediaire entre le reticulum endoplasmique et l'appareil de golgi dont la fonction est encore inconnue. Nous avons egalement montre que les sequences codantes de l'adnc de mr60, inserees dans un vecteur d'expression, permettent la surproduction de la proteine mr60 dans les cellules eucaryotes transfectees. L'expression de mr60 a ete etudiee au niveau de la transcription par northern et au niveau de la traduction par immunofluorescence dans differents types cellulaires et dans des cellules a differents etats de croissance ou de maturation. Nous avons montre que contrairement aux premiers resultats, mr60 n'est pas exprimee uniquement dans les cellules de la lignee monocyte/macrophage, mais aussi dans d'autres cellules comme les fibroblastes humains hos et les cellules de singe cos. De plus l'expression de mr60 est regulee negativement au niveau de la transcription lorsque les cellules hl60 et u937 sont differenciees en cellules proches des monocytes sous l'action d'ester de phorbol ou lorsque les cellules hos deviennent confluentes et ne se divisent plus. Cette proteine est une lectine specifique du mannose qui est recyclee entre l'appareil de golgi et le reticulum endoplasmique. Elle pourrait donc intervenir dans le recyclage des glycoproteines nouvellement synthetisees en reconnaissant leurs structures mannosylees