Regeneration par embryogenese somatique et transformation genetique par biolistique de bananiers (musa sp. ) di et triploides

par AGNES GRAPIN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de J. SCHWENDIMAN.

Soutenue en 1995

à l'ENSA MONTPELLIER .

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  • Résumé

    Dans le cadre du programme d'amelioration genetique du bananier du cirad, un procede de transformation genetique au moyen d'un canon a helium, couple a un systeme de regeneration par embryogenese somatique, a ete developpe. Le travail a ete essentiellement effectue sur le genotype french sombre, bananier plantain (aab) produisant des bananes a cuire consommees en afrique. Des suspensions embryogenes ont ete etablies a partir de cals friables porteurs de nombreux proembryons obtenus sur des fleurs males immatures. Ces suspensions sont heterogenes, comportant des agregats, des nodules, quelques proembryons et des cellules isolees. Par etalement sur un milieu semi-solide riche en cytokinines, les agregats et les jeunes proembryons de la suspension evoluent en embryons somatiques. Une etude histocytologique a ete menee afin de comprendre le mode d'entretien de la suspension et l'ontogenese des embryons somatiques, dont l'origine unicellulaire a ete montree. Ils se forment a partir des cellules des agregats qui ont la particularite d'etre riches en reserves proteiques, mais depourvues d'amidon. En cela, elles different des cellules embryogenes decrites jusqu'a present sur de nombreuses plantes. L'etalement d'1 ml de volume cellulaire permet la formation de 10#5 embryons, dont 10% a 40% sont convertibles en plantules. Des essais de conformite ont ete mis en place au cameroun. Les conditions optimales pour obtenir l'expression transitoire du gene rapporteur gus dans les cellules de bananier ont ete determinees. Six promoteurs, dont 4 reputes specifiques pour la transformation des monocotyledones, ont ete testes sur la suspension de french sombre, ainsi que sur des suspensions de deux autres genotypes de musa et sur une suspension de lolium multiflorum. L'efficacite des promoteurs est peu dependante des genotypes de bananier, mais il semblerait que les promoteurs efficaces pour la transformation des graminees ne soient pas forcement adaptes pour celles des membres du genre musa. Differents agents de selection ont ete testes. Des premiers essais de transformation stable ont ete realises avec un plasmide comportant les genes gus et bar sous le controle de la sequence promotrice de l'ubiquitine du mais


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  • Détails : 120 P.
  • Annexes : 170 REF.

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