Expression de l'ADNc IGF-II humain (human insulin-like growth factor II) dans des cellules animales recombinantes : purification et caractérisation de la protéine : étude du métabolisme des cellules CHO transfectées

par Hicham Bekkari

Thèse de doctorat en Biologie structurale moléculaire et cellulaire

Sous la direction de Francine Belleville-Nabet.

Soutenue en 1995

à Nancy 1 .


  • Résumé

    L’objectif de ce travail est l'étude de la production d'un facteur de croissance humain (insulin-like growth factor II) par des cellules animales recombinantes (CHO, chinese hamster ovary). La première partie est consacrée à l'expression de l'ADNc IGF-II dans les cellules CHO-K1. Pour cela, des cellules CHO-K1 ont été cotransfectées par les plasmides pcDNAI-IGF-II et pMAM-néo. Une analyse par dot-blot du milieu conditionné de chaque clone résistant à l'antibiotique G418 a permis de sélectionner les clones les plus producteurs d'IGF-II recombinant. Dans une seconde partie, nous avons mis au point une méthode immunoenzymatique de dosage de l'IGF-2 (ELISA), ce qui nous a permis de sélectionner le clone de cellule CHO le plus producteur d'IGF-II, CHO IGF-II. Cette production est de 400 ng/106cellules/24 h. La stabilité de production de l'IGF-II par les cellules CHO-IGF-II pendant 15 passages, ainsi que la présence de l'ADNc IGF-II dans l'ADN génomique des cellules recombinantes, après analyse par PCR, montrent l'intégration de l’ADNc IGF-II dans les cellules CHO-IGF-II. Dans une troisième partie, les caractéristiques structurales et biologiques de l'IGF-II recombinant ont été étudiées, le facteur de croissance obtenu qui a un poids moléculaire identique à celui de l'IGF-II natif, 7,5 kDa, et une activité biologique sur les cellules MCF-7. La quatrième partie de ce travail est consacrée à l'étude comparée du métabolisme entre les cellules CHO transfectées et non transfectées. Les cellules CHO recombinantes n'ont pas montré de différence dans leurs cinétiques de croissance et du métabolisme par rapport aux cellules sauvages

  • Titre traduit

    Expression of secreted recombinant human insulin-like growth factor-II (IGF-II) in Chinese hamster ovary cells


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Informations

  • Détails : 1 vol. (177 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 262 références

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