Etude de la dénaturation d'une protéine dimérique : la créatine kinase de muscle de lapin

Denaturation study of a dimeric protein: rabbit muscle creatine kinase

• Auteur / Autrice : Fabienne Couthon
• Direction : Christian Vial
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences. Biochimie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Christian Vial

Mots clés

Mots clés contrôlés

Protéines -- Électrophorèse

Dimères

Isoenzymes

Créatine kinase

Résumé

La creatine kinase est un enzyme essentiel a la repartition de l'energie dans certains tissus comme les muscles squelettique et cardiaque ou le systeme nerveux. Il existe des isoenzymes mitochondriaux et cytosoliques. Ces derniers sont exclusivement dimeriques et formes de deux sous-unites qui peuvent etre de type different (m: muscle, b: systeme nerveux). Ainsi, trois isoformes distinctes de creatine kinase cytosoliques peuvent etre mise en evidence (mm, bb, mb). Les isoenzymes mitochondriaux presentent la caracteristique unique d'exister sous deux formes moleculaires (octamerique ou dimerique) interconvertibles sous l'effet du ph et des substrats de l'enzyme. Les deux types d'isoenzymes differents dans leur comportement et leur localisation ont cependant une similitude de sequence elevee, de l'ordre de 65 a 70%. Neanmoins, leur structure tridimensionnelle n'a pas encore ete resolue, les cristaux obtenus n'etant pas exploitables. Notre etude a ete focalisee sur la forme mm. Nous avons dans un premier temps etudie les caracteristiques structurales de cet enzyme en combinant des techniques biochimiques et biophysiques. Nous avons ensuite entrepris une etude de denaturation et de renaturation. Differents agents (comme l'uree, le chlorure de guanidine, le ph, les fortes concentrations salines) dont le mode d'action est variable ont ete utilises pour caracteriser les interactions qui stabilisent le monomere, le centre actif et la structure globale de l'enzyme. Nous avons aussi recherche la presence d'etats intermediaires stables et plus particulierement, nous avons recherche la presence d'un etat type globule fondu. Enfin, la derniere etape de notre travail a consiste a suivre les modifications induites par le dodecyl sulfate de sodium (sds). La structure des complexes sds-proteine a ete discutee par rapport aux differents modeles existants