Mise au point de nouvelles couches sensibles biospécifiques (type Langmuir-Blodgett) pour la réalisation de biocapteurs ultrasensibles

par Agnès Girard-Egrot

Thèse de doctorat en Sciences. Génie biologique et médical

Sous la direction de Pierre Coulet.

Soutenue en 1995

à Lyon 1 .

Le président du jury était Pierre Coulet.


  • Résumé

    Ce travail concerne le developpement de nouvelles couches ultraminces hautement organisees, lipidiques et phospholipidiques, de type langmuir-blodgett, comme support d'insertion de sondes moleculaires pour l'etude des proprietes de reconnaissance bio-moleculaire et pour le developpement de systemes modeles de plus en plus organises pour la conception de nouveaux biocapteurs. La premiere partie de ce travail a ete consacree a la maitrise et a l'optimisation de la technique de langmuir-blodgett pour obtenir des multicouches lipidiques et phospholipidiques homogenes transferables de tres haute qualite. Cette etape d'optimisation a permis de mieux comprendre le phenomene de relaxation des monocouches d'acide gras et les parametres qui conditionnent la stabilite et l'integrite des monocouches dont depend la qualite des multicouches. Nous avons montre que la vitesse de transfert de la monocouche que nous avons definie comme la surface de film enlevee par unite de temps, controle directement la perte d'integrite de la monocouche pendant le transfert. Dans la seconde partie de ce travail, l'etude de l'integration de sondes enzymatiques de natures differentes a permis de montrer que ces supports sont appropries a la construction d'empilements artificiels de type lipide-proteine active correspondant a un modele de structure membranaire biologique. L'association de l'enzyme avec ces membranes et l'activite catalytique retenue ont ete caracterisees au moyen de techniques d'analyse sensibles et tres performantes. Le degre de structuration des empilements proteo-lipidiques a ete etudie en spectroscopie ir a transformee de fourier (irtf). L'activite des enzymes retenues en tres faible quantite a ete revelee pour la glutamate deshydrogenase par microscopie de fluorescence et pour la choline oxydase par electrochimie apres interfacage de la membrane bioactive sur un capteur amperometrique adapte. Cet interfacage pourrait permettre d'acceder au microenvironnement de l'enzyme et d'apprehender le comportement intrinseque de la choline oxydase immobilisee. L'ensemble des resultats montre que ces nouvelles membranes biospecifiques sont utilisables dans la realisation de nouveaux biocapteurs. De plus, le contact intime de l'enzyme avec le transducteur ouvre une voie nouvelle pour l'etude du comportement catalytique des enzymes en phase heterogene

  • Titre traduit

    Development of novel sensitive and biospecific langmuir-blodgett films for the design of biosensors


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Informations

  • Détails : 1 vol. (viii-395 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 379-395 et notes bibliographiques dans chaque article

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  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MF-1995-GIR
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