Biosynthese de la methionine chez les plantes superieures. Etude biochimique et moleculaire des enzymes de la voie de transsulfuration

par STEPHANE RAVANEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de R. DOUCE.

Soutenue en 1995

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Chez les plantes, l'atome de soufre de la methionine derive de la cysteine par une serie de reactions dites de transsulfuration faisant intervenir la cystathionine et l'homocysteine comme intermediaires. En presence de cysteine et d'o-phosphohomoserine, la cystathionine gamma-synthase catalyse une synthese de cystathionine qui est ensuite clivee en homocysteine, pyruvate et ammoniac par la cystathionine beta-lyase. La mise au point de techniques de dosage tres sensibles de ces activites enzymatiques a permis de demontrer que la cystathionine gamma-synthase et la cystathionine beta-lyase sont presentes uniquement dans le stroma des chloroplastes. Ces enzymes ont ensuite ete purifiees a l'homogeneite a partir de chloroplastes de feuilles d'epinard et leurs proprietes cinetiques et physicochimiques ont ete definies. La cystathionine gamma-synthase et la cystathionine beta-lyase jouent un role primordial dans le metabolisme cellulaire puisque l'inhibition de l'une ou l'autre de ces enzymes par la propargylglycine ou l'aminoethoxyvinylglycine est letale pour la plante. Un adnc codant pour la cystathionine beta-lyase d'arabidopsis thaliana a ensuite ete clone par complementation fonctionnelle d'un mutant d'e. Coli deficient en activite enzymatique endogene. Cette proteine est synthetisee sous la forme d'un precurseur polypeptidique de 50,4 kda qui est importe et clive dans le chloroplaste pour obtenir une sous-unite mature de 46 kda. La cystathionine beta-lyase d'a. Thaliana a finalement ete surproduite dans e. Coli. La purification de la proteine recombinante en grande quantite permet d'initier une etude structurale de l'enzyme ainsi que le developpement d'un test de criblage automatise de molecules chimiques en vue de la mise au point d'herbicides nouveaux et specifiques


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  • Détails : 143 P.
  • Annexes : 164 REF.

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