Le complexe nadph-oxydase producteur d'ions superoxyde des neutrophiles. Etude immunochimique des facteurs cytosoliques d'activation

par ALAIN JOUAN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de P. VIGNAIS.

Soutenue en 1995

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Le complexe nadph-oxydase producteur d'ions superoxyde des neutrophiles est compose de sous-unites cytosoliques et membranaires qui s'assemblent au cours du processus d'activation de l'enzyme. La proteine g monomerique rac stimule considerablement l'activation. Nous avons produit des anticorps monoclonaux, polyclonaux et anti-peptides contre les constituants cytosoliques de ce complexe (facteurs cytosoliques), et contre le systeme des proteine g monomeriques associees au complexe. Les anticorps nous ont permis de mettre au point une technique elisa hypersensible de detection et de dosage des deux facteurs cytosoliques p47 et p67, applicable au suivi de ces facteurs au cours de leur purification. Un anticorps monoclonal anti-p67 nous a permis d'immunoprecipiter a partir du cytosol un complexe contenant p47 et p67, fonctionnel dans l'activation de l'oxydase. Nous avons montre que la proteine g monomerique rac n'est pas associee a ce complexe dans le cytosol ce qui suggere qu'elle joue un role au niveau membranaire. Nous avons enfin suivi l'apparition des differents constituants du complexe nadph-oxydase au cours de la differenciation de cellules hl60 de promyelocytes immatures en neutrophiles et correle cette apparition moleculaire a celle de l'activite oxydase. Les constituants qui apparaissent le plus tardivement sont les facteurs cytosoliques p47 et p67. Leur expression maximale est necessaire pour l'activite oxydase optimale


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  • Détails : 104 P.
  • Annexes : 132 REF.

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