Identification et dosage immunologique de lesions de l'adn

par ISABELLE GIRAULT CIMAZ

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de D. MOLKO.

Soutenue en 1995

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Divers facteurs (agents oxydants, rayonnements) peuvent engendrer des modifications de bases de l'adn. Le premier volet de ce travail de these a consiste a identifier les produits de degradation des bases pyrimidiques par l'ozone. L'identification de ces composes a permis de mettre en evidence deux nouveaux derives et de conclure a un mecanisme d'action specifique. La suite du travail concerne la preparation d'anticorps diriges contre des modifications de bases de l'adn. Nous avons mis au point une nouvelle methode de preparation des antigenes destines a la production d'anticorps utilises pour la detection immunologique des lesions de l'adn. Ainsi, des anticorps polyclonaux diriges contre la 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8-oxogua) ont ete obtenus. L'utilisation de ces anticorps a permis de preparer des colonnes d'immunoaffinite, en vue de prepurifier la 8-oxogua a partir de fluides biologiques. D'autres applications ont ete realisees avec des anticorps monoclonaux. Il s'agit du dosage de 8-oxogua et de dimeres de thymine (thy<>thy) dans de l'adn isole et cellulaire. Cependant, la specificite de l'anticorps dirige contre 8-oxogua s'est averee insuffisante pour doser cette lesion par immunologie. Par contre, l'anticorps dirige contre les thy<>thy a permis de mettre en evidence, par un dosage elisa, la formation de ce defaut dans un adn isole ayant subi l'action de l'uv du vide lors du vol spatial biopan. Par ailleurs, un dosage par cytometrie en flux a permis de detecter les dimeres de thymine directement dans l'adn cellulaire irradie par le rayonnement uv-b. Dans une derniere partie, nous avons recherche des anticorps specifiques de la 8-oxogua dans le serum de diabetiques de type i. Ce travail a permis de mettre en evidence des auto-anticorps diriges, non pas contre la lesion de l'adn recherchee, mais contre l'albumine humaine traitee par naio#4 et nabh#4


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  • Détails : 160 P.
  • Annexes : 140 REF.

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