Approche moleculaire de la regulation de l'adherence cellulaire mediee par les integrines

par PASCAL POMIES

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de M. BLOCK.

Soutenue en 1995

à Grenoble 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    A l'aide de cellules cho15b bloquees en prometaphase par du nocodazole, nous avons etudie la fonction du recepteur de la fibronectine exprime a la surface de cellules mitotiques. Une etude par cytometrie en flux a l'aide d'un anticorps dirige contre cette integrine, et des etudes de fixation de fibronectine radiomarquee sur la membrane cellulaire, montrent qu'un nombre constant d'integrines est exprime a la surface cellulaire au cours du cycle cellulaire. De plus, le recepteur de la fibronectine est toujours dans un etat de haute affinite pour son ligand soluble ou insoluble au cours de la mitose. Ces resultats indiquent que l'arrondissement des cellules observe durant la mitose ne resulte pas d'une parte de l'affinite du recepteur pour son ligand extracellulaire ; ce changement morphologique serait plutot la consequence d'une desorganisation des plaques d'adherence. A partir d'un lysat de cellules cho15b, nous avons mis au point un test in vitro afin d'etudier l'interaction de la fibronectine avec le recepteur de la fibronectine dans un environnement cytosolique. Dans ce test, l'interaction integrine/fibronectine necessite du calcium intracellulaire, la calmoduline, et une activite phosphatase. De plus, l'action d'inhibiteurs specifiques de phosphatases et l'inhibition de l'interaction integrine/fibronectine par un anticorps dirige contre la calcineurine, la phosphatase dependante du calcium et de la calmoduline, suggerent que la calcineurine permet l'interaction entre le recepteur de la fibronectine et son ligand. Des experiences de marquage metabolique montrent que l'integrine elle-meme n'est pas la cible d'une cascade de phosphorylation/dephosphorylation impliquant la calcineurine et modulant l'affinite de l'integrine. Ces resultats montrent qu'in vitro, un substrat de la calcineurine regule l'affinite du recepteur de la fibronectine en interagissant avec un effecteur non-identifie


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  • Détails : 120 P.
  • Annexes : 169 REF.

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