Caracterisation des proprietes biologiques de la sequence vl30 rat et developpement de nouveaux vecteurs retroviraux mlv-vl30

par CHRISTOPHE TORRENT

Thèse de doctorat en Sciences de la vie

Sous la direction de Jean-Luc Darlix.

Soutenue en 1995

à École normale supérieure (Lyon) .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Les vecteurs retroviraux constituent un moyen elegant et efficace pour transferer un gene. Cependant, la sequence d'encapsidation psi+ momlv qui dirige l'encapsidation de l'arn recombinant presente des caracteristiques susceptibles de reduire l'efficacite et la securite biologique du transfert de gene: taille importante, presence de sequences virales codantes et homologies avec le genome auxiliaire des cellules d'encapsidation aussi, nous avons cherche a remplacer cette sequence par un signal d'encapsidation heterologue. L'arn vl30 (virus-like 30s), present dans les cellules de rat, est encapside dans les particules virales momlv (moloney murine leukemia virus). Le genome du virus du sarcome murin de souche harvey (hamsv) est issu de recombinaisons entre la sequence vl30 rat, le genome du retrovirus momlv et l'oncogene c-ha-ras. Dans le leader de ce retrovirus, la sequence d'encapsidation psi+ momlv a ete remplacee par une sequence vl30. Aussi, nous avons recherche la presence d'une sequence d'encapsidation dans la region vl30 rat du retrovirus hamsv. Notre etude a permis d'identifier dans la sequence vl30 rat, un signal d'encapsidation dont les caracteristiques sont remarquables: une efficacite d'encapsidation importante voire meme superieure a la sequence psi+ momlv, une taille reduite (590 nt), une absence d'homologies avec les sequences du genome auxiliaire et une absence de sequences virales codantes. La sequence vl30 rat contient egalement un signal de dimerisation. Les analyses genetiques et biochimiques de la dimerisation de l'arn hamsv suggerent que la formation de l'arn dimere debute par la reconnaissance des deux molecules d'arn au niveau d'un motif repete inverse present dans une structure de type tige-boucle. Enfin, nous avons egalement caracterise dans la sequence vl30 rat un signal d'entree directe des ribosomes ou ires (internal ribosomal entry site) qui favorise une traduction independante de la coiffe de l'oncogene v-ha-ras. La possibilite pour la sequence vl30 de diriger l'encapsidation de l'arn recombinant et l'initiation de la traduction d'un gene localise en 3' nous a permis de developper de nouveaux vecteurs retroviraux bicistroniques


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  • Détails : 224 P.
  • Annexes : 213 REF.

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