Influence de la pression sur le comportement cinétique et structural d'une alcool déshydrogénase mésostable extraite de levure et d’une alcool déshydrogénase thermostable extraite de Thermoanaerobium brockii

par Sandrine Dallet

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie

Sous la direction de Marie-Dominique Legoy.


  • Résumé

    La pression au même titre que la température, le pH, les solvants organiques, l'activité de l'eau, peut modifier la structure des biocatalyseurs ainsi que leur activité catalytique. Longtemps délaissée à cause des problèmes techniques inhérents à la pression, l'étude de ce paramètre thermodynamique connaît depuis une vingtaine d'années un nouvel essor. Le réacteur haute pression haute température (maxima de 250 MPa et 150°C) mis au point pour cette étude, permet de suivre in vitro l'influence de la pression sur les réactions enzymatiques catalysées par une alcool déshydrogénase (ADH) tétramérique thermostable (extraite de Thermoanaerobium brockii : TBADH). La détermination des paramètres cinétiques de ces deux enzymes a montré, dans le cas de YADH, que la pression inhibait l'activité de l'enzyme sans affecter son affinité pour l'éthanol. Par contre, la pression améliore le turn-over et l'affinité deTBADH pour ses substrats alcooliques, ceci pour des pressions allant jusqu'à 175 MPa avec un optimum correspondant à 100 MPa. Les variations de volume d'activation rendant compte des effets de la pression sur les réactions biochimiques ont été déterminées pour les deux enzymes. Ainsi, il a été montré que les variations de volume observées au cours des cinétiques catalysées par YADH sont principalement dues à des événements se produisant lors de la phase catalytique, alors que dans le cas de TBADH, il semble que ce soit lors de la fixation du substrat que les plus grands changements ont lieu. Les études structurales effectuées par la méthode des dérivés seconde en chromatographie liquide haute performance ont montré que les modifications d'activités n'étaient pas dues comme dans la plupart des cas, à une dissociation des enzymes oligomériques mais à une modification de la structure tridimensionnelle de l'enzyme.

  • Titre traduit

    Effect of hydrostatic pressure on kinetic, and structural behaviour of a mesostable alcohol dehydrogenase from baher's yeast and a thermostable alcohol dehydrogenase from Thermoanaerobium brockii


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Informations

  • Détails : 1 vol. (156 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 138 réf.

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  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1995 DAL 839
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