Résistance de Salmonella Typhimurium aux détergents biologiques et chimiques : effet sur la colonisation intestinale et mise en évidence d'un gène de type acrB/F de Escherichia coli/ par Fabrice Lacroix

par Fabrice Lacroix

Thèse de doctorat en Science des aliments

Sous la direction de A. DESCHAMPS.

Soutenue en 1995

à Bordeaux 1 .

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  • Résumé

    Le genre salmonella regroupe des bacteries a gram-negatif pathogenes pour l'homme et les animaux qui provoquent essentiellement des gastro-enterites, des speticemies et des affections genitales. Leur principal reservoir est le tube digestif des hommes et surtout des animaux ou elles peuvent etre portees asymptomatiquement. La probabilite d'atteindre l'intestin, porte d'entree de l'infection, de survivre et de coloniser les tissus depend notamment de la capacite des salmonelles a resister aux facteurs antibacteriens lies a la flore ou a l'hote, rencontres lors de leur transit intestinal. En particulier, les salmonelles sont resistantes aux sels biliaires physiologiquement deverses dans la partie proximale de l'intestin grele, au point que ces detergents biologiques sont utilises dans les milieux selectifs destines a les isoler. Ces bacteries resistent aussi a de nombreux detergents chimiques. En l'absence de souches sauvages virulentes hypersensibles aux sels biliaires, des mutants sensibles ont ete obtenus par insertion aleatoire du transposon tnphoa et testes in vitro et in vivo. Une collection de 3000 mutants transpositionnels de salmonella typhimurium c5 a ete constituee et 1432 de ces mutants ont ete cribles pour une hypersensibilite aux sels biliaires. Les trois souches mutantes retenues presentaient: (i) trois spectres differents de sensibilite aux sels biliaires et a divers detergents chimiques, (ii) trois insertions chromosomiques uniques et dans des sites differents. Le mutant lx1054 etait le plus sensible des trois mutants etudies. Le locus portant le transposon dans ce mutant a ete clone et partiellement sequence. Les polypeptides potentiellement codes par ces fragments d'adn presentaient une forte similarite avec les proteines acrb et acrf, des molecules d'efflux presentes dans la membrane cytoplasmique chez e. Coli. Le mutant lx1054 s'est revele instable phenotypiquement in vitro, et comme la souche sauvage, hypovirulent dans un modele murin. Afin de tester in vivo une souche a la fois sensible et virulente, la souche 312-21a3 de s. Typhimurium a ete mutee par recombinaison homologue du meme gene inactive par insertion d'une cartouche kanamycine. Le mutant obtenu, sensible aux detergents, etait virulent apres inoculation orale des souris. Cependant il presentait transitoirement une capacite reduite a coloniser la partie proximale de l'intestin grele de souris. La majorite des bacteries reisolees des souris etait redevenue resistante aux detergents. Les mecanismes de cette reversion phenotypique observee in vitro et in vivo restent inconnus. Ainsi, en utilisant des mutants sensibles aux sels biliaires et a certains detergents, il est montre que la capacite de resister a ces molecules participe a l'avantage selectif des salmonelles dans l'instestin grele. Un gene implique dans cette resistance a ete identifie

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