Etudes biochimique et structurale du domaine de fixation à la cellulose de l'endoglucanase Z sécrétée par Erwinia chrysanthemi

par Emmanuel Brun

Thèse de doctorat en Biologie structurale

Sous la direction de Dominique Marion.

Soutenue en 1995

à Aix-Marseille 2 , en partenariat avec Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences (autre partenaire) .

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  • Résumé

    Erwinia chrysanthemi est une enterobacterie phytopathogene. Son pouvoir pathogene est du essentiellement a la production d'enzymes extracellulaires telles que les pectinases, cellulases et proteases. Les pectinases et cellulases sont secretees par la voie generale de secretion (gsp), appelee out. Notre etude utilise la cellulase egz en tant que modele de proteine secretee pour identifier les motifs structuraux portes par la proteine secretee et reconnus par les composants de la machinerie de secretion. La proteine egz est constituee de deux domaines fonctionnellement independants: un domaine catalytique (cd) et un domaine de fixation a la cellulose (cbd), relies par une region charniere. Les etudes precedentes ont montre que des contraintes structurales liees a la secretabilite de egz etaient presentes dans chacun des domaines. Dans un premier temps, un pont disulfure a ete mis en evidence dans le cbd. L'elimination de cet element de structure tertiaire, conduit a une proteine fonctionnelle, mais qui reste accumulee dans le periplasme. Les resultats obtenus montrent que le pont disulfure est forme dans le periplasme avant que la proteine egz ne traverse la membrane externe et qu'il est necessaire pour que la proteine egz puisse interagir avec la machinerie out, suggerant que la conformation finale de la proteine est compatible avec la secretabilite. Dans un second temps, nous nous sommes interesses a la determination de la structure tridimensionnelle du cbd de egz par rmn bidimensionnelle. Le fragment d'adn qui porte l'information codante du cbd a ete clone dans un plasmide d'expression periplasmique en aval d'une sequence signal typique. Ce plasmide, une fois introduit dans e. Coli permet la production de cbd mature (dans lequel la sequence signal est clivee et le pont disulfure est forme). L'analyse par rmn 2d du proton du cbd purifie revele une structure pyramidale constituee de deux feuillets beta antiparalleles irreguliers et d'un cur hydrophobe stabilisant le domaine

  • Titre traduit

    Structural study of the cellulose binding domain of the endoglucanase Z secreted by Erwinia chrysanthemi


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Informations

  • Détails : 1 vol. (169 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr.: p. 159-169

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  • Bibliothèque : Université Aix-Marseille (Marseille. Luminy). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : L24848
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