Préparation et caractérisation des anticorps monoclonaux anti lipase gastrique humaine : étude des relations structure-fonction, immunopurification et dosage immunoenzymatique de la lipase gastrique humaine

par Mustapha Aoubala

Thèse de doctorat en Immunologie

Sous la direction de Robert Verger.

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  • Résumé

    Cinq anticorps monoclonaux (acm) anti-lipase gastrique humaine (lgh) ont ete prepares et caracterises. Les experiences d'immunoinactivation de la lgh ont permis de definir trois classes d'acm suivant leur effet inhibiteur. Les tests d'additivite realises a l'aide d'un elisa ont montre que les cinq acm sont diriges contre deux regions antigeniques differentes. Des experiences de trypsinolyse limitee de la lgh et d'immunotransfert ont permis la localisation de ces deux regions antigeniques au niveau de la sequence primaire de la lgh et celle du pont disulfure des lipases gastriques humaine et de lapin. L'exces interfacial de la lgh, en l'absence ou en presence d'acm, a ete determine par un test elisa en utilisant l'enzyme biotinyle, ce qui nous a permis pour la premiere fois de mesurer l'activite specifique de la lgh sur un film monomoleculaire de diglyceride etale a l'interface air-eau. L'effet des cinq acm anti-lgh sur l'interaction de l'enzyme avec une interface lipide/eau a ete etudie. Quatre acm reduisent l'activite lipolytique de la lgh biotinylee et diminuent egalement la quantite d'enzyme adsorbee a l'interface de facon significative. Ce resultat explique en partie l'effet immuniactivateur de ces acm. Les epitopes reconnus par ces quatre acm sont probablement situes dans ou a proximite de la region de la lgh qui se fixe specifiquement aux lipides. L'acm 35-2 a ete utilise pour mettre au point une methode de chromatographie d'immunoaffinite tres performante pour la purification de la lgh a partir de suc gastrique humain ainsi qu'un elisa sur des prelevements duodenaux

  • Titre traduit

    Preparation and characterization of monoclonal antibodies anti human gastric lipase: structure-function relationships, immunopurification and immunoenzymatic titration of human gastric lipase


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Informations

  • Détails : 1 vol. ( 130 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr.: f. 50-65

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  • Bibliothèque : Université Aix-Marseille (Marseille. Luminy). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : L24880
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