Etude des particularites conformationnelles de fragments d'adn anormalement retardes sur hplc d'echange d'anions

par FRED FACK

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de BASILE SARANTOGLOU.

Soutenue en 1994

à Strasbourg 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Des fragments d'adn double brin particuliers sont caracterises par une elution anormale sur hplc d'echange d'anions (hplc-ea). Ils sont elues plus tard que leur taille ne le laisse prevoir, alors que la separation se fait generalement en fonction des tailles reelles croissantes des fragments. Des fragments retardes ont ete mis en evidence dans des adn de differentes origines naturelles (plasmide pbr322, bacteriophage lambda, virus simien sv40, plasmide 2), et sont frequemment localises dans des regions fonctionnelles (regions promotrices, origines de replication, sites de recombinaison). Nous avons montre que les fragments retardes contiennent generalement des regions d'adn courbe. L'elution retardee n'est cependant pas due a la courbure en tant que motif architectural, mais a la presence de sequences qui peuvent potentiellement adopter une conformation courbe, comme l'indiquent le maintien d'une elution retardee a des temperatures elevees et son insensibilite a la position de la region courbe. Le comportement chromatographique de fragments d'adn qui sont reconnus avec des affinites differentes par des proteines specifiques, en particulier la poly(adp-ribose) polymerase (parp) et le represseur du phage 434, a ete etudie. Les fragments caracterises par une elution retardee sont reconnus avec des affinites plus elevees que les fragments de reference, qui interagissent plus faiblement, ou pas du tout, avec ces proteines. Dans le dernier volet de ce travail nous avons etudie l'effet de differents motifs de sequence de 8 paires de bases at contigues, d(w)8, sur le comportement chromatographique de courts fragments d'adn double brin. La retention de fragments, de taille et composition nucleotidique identiques, est inversement correlee a la stabilite thermique des doubles brins. La somme des resultats obtenus montre qu'une stabilite helicoidale reduite de l'adn b est determinante pour le potentiel d'interaction ionique accru d'un fragment double brin sur hplc-ea

  • Titre traduit

    Study of conformational particularities of dna fragments displaying retarded elution upon anion-exchange hplc


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  • Détails : 286 P.
  • Annexes : 185 REF.

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