Identification de mutants conditionnels d'escherichia coli repares par la glycine betaine ; effets de la betaine sur l'activite de quelques proteines

par MARTINE AYACHE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques

Sous la direction de T. BERNARD.

Soutenue en 1994

à Rennes 1 .

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  • Résumé

    Des mutants lac#- et divers auxotrophes d'escherichia coli dont le phenotype sauvage est restaure par la glycine betaine (gb) ont ete isoles pour la premiere fois et caracterises. Incapables de se developper sur un milieu minimal, leur croissance est declenchee lorsque le milieu est additionne de gb. La vitesse de croissance apparait directement liee a la concentration intracellulaire en gb. La gb#1#4c, activement absorbee, n'est pas metabolisee. La betaine stimule fortement l'activite de plusieurs proteines modifiees par mutagenese ntg. C'est le cas de la b-galactosidase, de la permease a lactose et de la diaminopimelate decarboxylase pour les mutants am12, at42 et n27 respectivement. La mutation de n27 (lys#-) a ete localisee sur le gene lysa, codant la dap decarboxylase. Le clonage de ce gene a permis d'identifier la mutation (remplacement de ser en phe) sur la partie cooh de la proteine. La surproduction de cette enzyme par des methodes genetiques chez la souche sauvage k10, a permis d'apporter des precisions sur l'effet de la gb. L'activite enzymatique, inhibee de facon drastique par nacl a 0,5 m, est restauree par l'addition de betaine au milieu reactionnel. Elle n'agirait pas sur le reassemblage des sous-unites mais plutot au niveau du site actif de l'enzyme ; son role serait de retablir la conformation active de proteines destabilisees durant la mutagenese ou par le milieu environnant. Enfin, une etude sur la glutamate deshydrogenase, enzyme cle pour la synthese du glutamate qui joue un role essentiel dans l'osmoregulation, a permis de montrer que la betaine a faible concentration (0,2 m) inhibe l'activite de l'enzyme. L'ensemble des resultats permet ainsi d'envisager pour la glycine betaine en plus de son effet osmoprotecteur, un role modulateur de l'activite de certaines proteines cellulaires


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Informations

  • Détails : 121 P.
  • Annexes : 265 REF.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Rennes I. Service commun de la documentation. Section sciences et philosophie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TA RENNES 1994/159
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