Purification et caractérisation biochimique d'une glycoprotéine soluble, apparentée aux HSP902, ligand biologique de la lectine L-14-I du cerveau humain

par Ahmed Chadli

Thèse de doctorat en Génie biologique et médical

Sous la direction de Michel Caron.

Soutenue en 1994

à Paris 13 .


  • Résumé

    Ce travail s'inscrit dans la thématique de recherche du rôle biologique de la lectine soluble l-14-i de cerveau humain spécifique des n-acetyllactosamines. Deux aspects de recherche complémentaires ont été développés dans le cadre de cette thèse: dans la première partie, la variation de la fluorescence intrinsèque de la l-14-i en fonction de la concentration de ligands nous a permis de déterminer les constantes d'association de la lectine avec le lactose (2,6 10exp2 m-1) et avec la n-acetyllactosamine (8 10exp2 m-1). L'immobilisation du lactose sur un polymère soluble (polyacrylamide) améliore la capacité de liaison de ce saccharide par la lectine. Ce polymère fonctionnalise nous a servi dans la mise au point d'un test quantitatif en microplaque, par compétition entre la lectine marquée ou non a la biotine vis-à-vis du polymère. Cet outil permet la détection des lectines reconnaissant les lactosamines dans les extraits tissulaires et cellulaires et dans les liquides biologiques complexes. Dans la seconde partie nous avons purifiée et caractérisé une glycoprotéine soluble de cerveau humain, ligand biologique potentiel de la l-14-i. Il s'agit d'un complexe de MR égale a 440 000 dont une seule composante (82 kda) est glycosylée. La masse de la copule glucidique de la 82 kda représente 25% de sa masse totale. L'étude de la structure des glycannes démontre la présence de chaînes complexes substituées ou non par des résidus d'acides sialique en 2-6 sur les lactosamines terminales et par des résidus fucoses en 1-6 sur la glcnac la plus interne. Le séquençage de fragments trypsiques de la 82 kda montre une grande homologie avec une protéine de choc thermique (hsp90). La spectrométrie de masse à désorption laser assistée par matrice (mald-ms) donne une estimation de 60% d'homologie. Une troisième confirmation de cette parentée est obtenue grâce à l'immunodétection avec des anticorps anti-hsp90. Cette étude montre pourtant que la 82 kda et l'hsp90 ne sont pas reconnues de façon identique par l'anticorps monoclonal et les deux anticorps polyclonaux employés. Ce travail ouvre de véritables perspectives dans la recherche des fonctions encore très mal définies de deux familles de molécules: les lectines l-14 et les protéines de choc thermique hsp90

  • Titre traduit

    ˜A œpotential soluble ligand of human brain lectin l-14-i: purification, biochemical characterization and relationship with hsp90


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Informations

  • Détails : 1 vol. (156 f.-18)
  • Annexes : Bibliogr. f.143-156. Annexes

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris 13 (Villetaneuse, Seine-Saint-Denis). Bibliothèque universitaire. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH 1994 046
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