Supports de silice passivée à ligands biospécifiques : sSynthèse, caractérisation et propriétés de séparation en chromatographie des protéines

par Anne-Marie Serres

Thèse de doctorat en Chimie. Biomatériaux

Sous la direction de Daniel Muller.

Soutenue en 1994

à Paris 13 .


  • Résumé

    Des supports, constitués de billes de silice poreuse passivée par des polysaccharides modifiés, sont réalisés en vue d'être utilisés pour la séparation de protéines par chromatographie liquide haute performance (hplc). La silice, du fait de ses excellentes propriétés mécaniques est la phase stationnaire la plus utilisée en hplc. Cependant, une modification de la surface est nécessaire afin de minimiser les interactions non spécifiques entre les groupements silanols présents à la surface de la silice et les protéines. Ainsi, les billes de silice poreuse sont passivées par des dextranes portant une quantité optimisée de groupements diethylaminoethyls chargés positivement. Cette couche macromoléculaire est réticulée et peut être facilement activée et fonctionnalisée par des ligands actifs. Ces supports gardent les propriétés mécaniques de la silice et peuvent être utilisés, après fonctionnalisation, en chromatographie d'affinité haute performance (hpac). L'étude des mécanismes d'adsorption des protéines sur ces supports demande une meilleure connaissance de la surface d'adsorption. Nous avons choisi d'étudier, comme modèle d'affinité, les supports de silice passivée, greffés par une amidine présentant une affinité pour des serines-protéases et notamment la trypsine. Les surfaces de ces supports sont observées en utilisant diverses méthodes physico-chimiques, en particulier, la microscopie électronique, la microscopie à effet de force, la résonance paramagnétique électronique. Les paramètres physico-chimiques de l'affinité de ces supports pour la trypsine sont déterminés par établissement des isothermes d'adsorption et par hpac afin de mettre en évidence des corrélations entre les caractéristiques structurales de ces supports et leurs propriétés de séparation et ainsi d'optimiser leurs performances en chromatographie d'affinité. Les influences de divers paramètres caractéristiques des supports tels que la fonctionnalisation, la masse molaire moyenne et le taux de réticulation du dextrane sur les propriétés de surface et les performances chromatographiques sont étudiées. Les supports de silice enrobée sont ensuite fonctionnalisés par des ligands présentant une spécificité pour des anticorps de type immunoglobulines g (igg). Trois ligands différents sont utilisés: la protéine a, des groupements présentant des interactions de type thiophilique et l'acide n-acetylneuraminique. Les performances de ces trois supports d'affinité pour la séparation des quatre sous-classes d'igg sont étudiées par hpac. Ces supports sont utilisés pour la purification d'anticorps monoclonaux de type igg a partir d'ascites de souris.

  • Titre traduit

    Coated silica supports with biospecific ligands: synthesis, characterization and properties of separation in chromatography of proteins


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Informations

  • Détails : 1 vol. (240 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p.216-231

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  • Bibliothèque : Université Paris 13 (Villetaneuse, Seine-Saint-Denis). Bibliothèque universitaire. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH 1994 082
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