Preparation and structural study of the dna-binding domain of the cyp1 protein of the yeast saccharomyces cerevisiae

par JOHANNA TIMMERMAN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de J.-Y. LALLEMAND.

Soutenue en 1994

à Paris 11 .

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  • Résumé

    Dans la levure saccharomyces cerevisiae, la proteine cyp1 est un regulateur de la transcription de nombreux genes dont l'expression est dependante de l'oxygene. Nous nous sommes interesse a la determination de la structure tridimensionnelle du domaine de fixation a l'adn de cette proteine. Cette partie contient un motif cys-xaa(2)-cys-xaa(6)-cys-xaa(6)-cys-xaa(2)-cys-xaa(8)-cys, que l'on retrouve dans de nombreuses proteines de levure interagissant avec l'adn, en particulier dans la proteine gal4. Le but a long terme est de determiner le complexe cyp1-adn par resonance magnetique nucleaire. Dans ce travail nous presentons le clonage et l'expression dans escherichia coli des quatre fragments differents correspondant a la partie n-terminale de l'activateur cyp1 responsable de la fixation a l'adn. Le fragment cyp1(49-126) a ete choisi pour une etude structurale par resonance magnetique nucleaire. Pour ce fragment, un protocole de purification a ete mis au point. Nous montrons ensuite que le zinc est un element essentiel de la structure de la proteine et que le fragment cyp1(49-126) possede 2 atomes de zinc. Les memes resultats ont ete observes lorsqu'on substitue deux atomes de zinc par les atomes cadmium 113. Par resonance magnetique nucleaire, nous avons demontre que les six cysteines du motif ligandent les deux atomes de cadmium. Le fragment a ete ensuite marque avec de l'azote 15. L'ensemble des experiences rmn homonucleaires a deux dimensions (cosy, tocsy et noesy) et heteronucleaires a deux et trois dimensions (hmqc, noe-hmqc, hohaha-hmqc) a permis l'attribution de la partie n-terminale de cyp1(49-126). Les donnees experimentales obtenues par ces experiences ont ete utilisees dans des programmes de modelisation, diana et x-plor. Une structure tridimensionnelle du fragment a pu etre presentee et montre que notre fragment est replie en cluster a zinc


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Informations

  • Détails : 290 P.
  • Annexes : 239 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-012033
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