Techniques de resonance magnetique nucleaire a trois dimensions optimisees par des impulsions de gradient de champ. Application a la determination des elements de structure secondaire de l'angiogenine bovine

par CHRISTINE ALBARET-REISDORF

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de M.-A. DELSUC.

Soutenue en 1994

à Paris 11 .

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  • Résumé

    Le champ d'investigation de structures de proteine par resonance magnetique nucleaire (rmn) s'est considerablement elargi grace aux progres realises dans la production de proteines recombinantes et dans les techniques rmn heteronucleaires. Toutefois, l'expression d'une proteine eucaryote possedant des ponts dissulfures se revele difficile dans des systemes bacteriens tels que e. Coli. Par consequent, des recherches sur de telles macromolecules ne sont pas toujours envisageables par rmn de l'isotope #1#5n ou #1#3c. Nous montrons qu'en disposant d'une grande quantite de proteine native (100mg), il est possible d'effectuer une etude sur une proteine de 125 acides amines, l'angiogenine bovine par rmn exclusivement homonucleaire. Cette proteine est un inducteur puissant de neovascularisation de tissus sains et surtout de metastases. La determination de sa structure spatiale pourrait permettre d'ameliorer les connaissances sur ses differentes proprietes biologiques en vue d'etablir des inhibiteurs potentiels. Cependant la taille relativement importante de la macromolecule nous a contraint a developper les experiences 3d homonucleaires afin de lever les degenerescences observees sur les cartes 2d. Leur optimisation par les techniques d'impulsions de gradient de champ nous a permis d'ameliorer la qualite des spectres obtenus. Un apercu des differentes sequences disponibles pour realiser un melange isotrope est egalement expose. L'exploitation des spectres 3d noe-hohaha et hohaha-noe a permis d'etablir une strategie systematique de l'attribution sequentielle. Ainsi, 96% des resonances hydrogenes du squelette peptidique et 86% des chaines laterales ont pu etre reperees. Les divers elements de structure secondaire de l'angiogenine bovine ont ete determines par une analyse couplee des spectres 2d et 3d. Pour finir, une comparaison preliminaire d'une structure modele avec la structure de la proteine homologue, la ribonuclease a bovine est donnee


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  • Détails : 147 P.
  • Annexes : 183 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-011860
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