Etude comparative de la glucose oxydase soluble et immobilisee. Quelques applications biotechnologiques des enzymes immobilises

par Ahmed Haouz

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Claude Burstein.

Soutenue en 1994

à Paris 7 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Nous avons choisi la glucose oxydase d'aspergillus niger dans le but d'etudier les modifications structurales et dynamiques que subit un enzyme lors de son immobilisation. Cet enzyme est une flavoproteine catalysant l'oxydation du d-glucose. Grace a des techniques physico-chimiques (absorption optique, fluorescence, dichroisme circulaire) appliquees a deux fluorophores (les residus tryptophane et le fad), nous avons pu suivre les modifications entre l'enzyme soluble et immobilisee. L'inhibition de fluorescence par l'acrylamide des residus tryptophane montre que la diffusion de cette molecule est ralentie quand la glucose oxydase est immobilisee. L'etat d'oxydation du fad, comme son absence, affectent la structure, la dynamique, et la stabilite de l'enzyme soluble. L'etude de la stabilite thermique de la glucose oxydase soluble et immobilisee, montre que l'enzyme immobilise de facon covalente est plus stable que l'enzyme soluble. L'energie d'activation de l'inactivation thermique de la glucose oxydase soluble et immobilisee, est toujours la meme: 70kcal/mol. De l'ensemble de ces resultats, il semble que l'immobilisation covalente de la glucose oxydase, qui n'affecte pas sa structure tridimensionnelle, augmente sa resistance a la denaturation thermique. Quant a l'application biotechnologique des enzymes immobilises, nous avons elabore des biocapteurs utilisant une electrode de clark comme transducteur, associes a des enzymes immobilises covalament sur la membrane ultrabind. Pour le domaine de l'environnement, nous avons elabore deux biocapteurs: l'un base sur la pyruvate oxydase (qui dose les phosphates), et l'autre base sur la l-lactate deshydrogenase couplee a la l-lactate oxydase (qui dose les metaux lourds). Pour le domaine agro-alimentaire, le biocapteur base sur l'ascorbate oxydase qui dose l'ascorbate. Pour les domaines pharmaceutique et medical, le biocapteur base sur la co-immobilisation de la l-lactate deshydrogenase et de la l-lactate oxydase nous permet de doser les deshydrogenases a nad(h), et leurs substrats reagissant avec le nad#+

  • Titre traduit

    Comparative study of soluble and immobilized glucose oxidase. Some biotechnologicals applications of immobilized enzymes


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  • Détails : 139 P.
  • Annexes : 65 REF.

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