Organisation du systeme cellulolytique de clostridium thermocellum : interaction des sous-unites du cellulosome avec la proteine d'echafaudage cipa et la proteine de surface olpa

par SYLVIE SALAMITOU

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de P. BEGUIN.

Soutenue en 1994

à Paris 7 .

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  • Résumé

    Clostridium thermocellum, bacterie thermophile anaerobie, est l'un des microrganismes les plus performants en ce qui concerne l'hydrolyse de la cellulose cristalline. L'hydrolyse de la cellulose chez cet organisme est realisee par des complexes extracellulaires de haute masse moleculaire, appeles cellulosomes. Ces complexes comportent au moins 14 composants differents, dont la plupart possedent des activites hydrolitiques. Aucune activite catalytique n'a pas contre ete attribuee au composant cipa, qui joue le role de facteur d'assemblage des complexes. La plupart des sequences des cellulases de c. Thermocellum comportent un domaine tres conserve constitue d'un segment duplique. Le travail effectue a porte d'une part sur l'elucidation du mecanisme d'assemblage des cellulosomes, et d'autre part, sur la caracterisation d'olpa, une proteine dont la sequence presente des similitudes avec celle de cipa et avec des determinants presents dans diverses proteines de surface bacterienne. La liaison du segment duplique avec cipa a ete demontree pour deux sous-unites catalytiques des cellulosomes. La proteine cipa a ete etudiee par proteolyse menagee. La caracterisation des fragments obtenus montre que cette proteine possede une structure multimodulaire et comporte des domaines distincts responsables de la fixation des sous-unites catalytiques et de l'adsorption a la cellulose, respectivement. Le segment duplique d'une des sous-unites catalytiques (celd) interagit avec l'un des domaines complementaires de cipa avec une constante d'affinite de 4. 7#. 10#7 m#-#1. L'ensemble de ces resultats a suggere que cipa est une proteine d'echafaudage des cellulosomes. Par ailleurs, la sequence de cipa comporte egalement un segment duplique, qui interagit avec un ensemble de proteines encore inconnues de c. Thermocellum. La localisation de la proteine olpa dans la couche externe de la surface de c. Thermocellum a ete etablie par deux approches complementaires: biochimie et visualisation par microscopie electronique. Par ailleurs, il a ete montre que le segment duplique de celd interagit avec le domaine complementaire d'olpa avec une constante d'affinite de 6. 9#. 10#6 m#-#1. L'ensemble de ces donnees laisse supposer que le role d'olpa pourrait etre de fixer des cellulases individuelles a la surface des cellules


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Informations

  • Détails : 167 P.
  • Annexes : 314 REF.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS1994
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