Production dans le systeme baculovirus de la sous-unite alpha de la transducine. Etude par mutagenese dirigee de son interaction avec la sous-unite betagamma de la transducine et avec l'effecteur

par EVA FAUROBERT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de M. CHABRE.

Soutenue en 1994

à Paris 7 .

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  • Résumé

    Grace a la description approfondie de chaque etape de la phototransduction, le segment externe du batonnet retinien constitue un modele biologique ideal pour l'etude par mutagenese dirigee des relations qui existent entre la structure et la fonction de la sous-unite de la transducine (t), la proteine g du systeme. La mise au point de l'expression de t dans le systeme baculovirus a constitue la premiere etape de ce projet. Nous montrons que la proteine recombinante produite se lie au recepteur, la rhodopsine photoactivee, change de conformation lors de l'echange de son gdp par un gtp et active l'effecteur, la phosphodiesterase specifique du gmpc (pde). Nous montrons que la deletion de sa sequence de myristylation diminue fortement l'affinite de t pour la membrane, et que ceci a deux consequences. D'une part, la proteine mutante n'est pas capable de s'associer a t et d'autre part, elle active moins efficacement la pde que t native. L'entree du gtp dans le site nucleotidique de la proteine g provoque un changement de conformation de la proteine. Cette transition conformationnelle s'accompagne d'une augmentation de la fluorescence intrinseque de la proteine g. Nous montrons que la variation de fluorescence de t est due au mouvement de son tryptophane 207 situe a proximite du site de liaison du troisieme phosphate. D'autre part, nous montrons que la substitution du tryptophane 207 par une phenylalanine abolit totalement la capacite de t a activer la pde, et que ceci est du a une diminution de 100 fois de son affinite pour la sous-unite inhibitrice de la pde (pde). La reintroduction d'un tryptophane a quatre acides amines de sa position d'origine redonne a la proteine la capacite d'activer l'effecteur. Le tryptophane 207 est donc implique, probablement par l'intermediaire d'une liaison hydrogene, dans la formation du complexe t-pde


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Informations

  • Détails : 129 P.
  • Annexes : 157 REF.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS1994
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