Etude de deux systemes de transport des ions chlorure dans le reticulum endoplasmique pancreatique de porc : canal chlorure et echangeur cl/oh. regulation par les nucleotides et purification de proteines canalaires

par BEATRICE BEGAULT

Thèse de doctorat en Physiologie

Sous la direction de A. EDELMAN.

Soutenue en 1994

à Paris 7 .

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  • Résumé

    Notre travail a consiste a caracteriser les proteines capables de transporter les ions chlorure (cl) dans le reticulum endoplasmique du pancreas de porc. Nous avons etudie les reponses pharmacologiques de ces transporteurs et leur regulation par les nucleotides. Ces etudes nous ont permis d'entreprendre la purification des proteines canalaires permeables aux ions cl. Les systemes de transport des ions cl ont ete identifies en mesurant le gonflement osmotique des microsomes en presence d'une force electromotrice favorable a l'influx des ions cl. Nous avons distingue deux systemes de transport des ions cl a travers un canal et un echangeur cl/oh. Ces deux systemes de transport sont sensibles au dids, au sits, et a l'iaa 94-95. Ces deux transporteurs sont actives differemment par l'atp, et presentent un site de liaison pour l'atp. De plus, l'echangeur cl/oh est dote d'un site de liaison pour le gtp. Apres avoir determine les conditions optimales de solubilisation des proteines microsomales, la purification des proteines canalaires a ete entreprise a l'aide d'une colonne echangeuse d'anions suivie d'une colonne d'atp-agarose. Les resultats du test d'activite reposant sur un indicateur fluorescent (spq) sensible a la concentration intraliposomale des ions cl, ont montre la presence d'une conductance cl dans la fraction proteique eluee a 0,9 m de kcl de la deuxieme colonne. Le profil electrophoretique de cette fraction a revele la presence de trois proteines de poids moleculaires 15, 56 et 64 kd. La proteine cftr presente parmi les proteines microsomales n'a pu etre detectee apres solubilisation. Par contre, la proteine 64 kd a pu etre retrouvee dans toutes les fractions eluees des deux colonnes de chromatographie sans correlation avec l'activite de transport des ions cl


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Informations

  • Détails : 151 P.
  • Annexes : 268 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Cergy-Pontoise. Bibliothèque universitaire. Site de Saint-Martin.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS PAR 7 1994 BEG
  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS1994
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